 |
|
Цветная реакция с минерализатом
| ОПЫТ, мл | СТАНДАРТ, мл | ||
| Минерализат Стандартный раствор | 1,0 — | — 1,0 | |
| Раствор NaOH | Добавляют до нейтрализации кислоты. Величину рН проверяют по лакмусовой бумажке — в нейтральной среде окраска переходит в синюю. Излишек щелочи вызывает помутнение раствора. | ||
| Дистиллиров. вода Реактив Несслера | 8,0 2,0 | 8,0 2,0 | |
| Колориметрируют при 610-640 нм (красный светофильтр). | |||
Расчёт.
[Остаточный азот, ммоль/л] = 
где ЕОП — оптическая плотность пробы, ЕСТ — оптическая плотность стандарта, ССТ — концентрация стандартного раствора
Нормальные величины.
Сыворотка 14-28 ммоль/л
Клинико‑диагностическое значение.
Остаточный азот является важным показателем состояния белкового обмена. Увеличение фракций остаточного азота (азотемия) по своему характеру может быть абсолютным, связанным с действительным накоплением азотистых компонентов в крови, и относительным, связанным с дегидратацией. В свою очередь, абсолютная азотемия может быть ретенционная (почечного происхождения) и продукционная. Ретенционная возникает в результате задержки выведения и различается на азотемии почечного происхождения (заболевания клубочков – нефриты, туберкулез почек, нефросклероз и др) и внепочечного происхождения. Внепочечные, в свою очередь, подразделяются на надпочечные (результат нарушения гемодинамики и падения фильтрационного давления при сердечно-сосудистой недостаточности, снижении артериального давления) и подпочечные (при гипертрофии или аденоме простаты, почечнокаменной болезни). Продукционная азотемия выявляется при всех состояниях, связанных с увеличением распада белков, от ретенционной ее отличает повышение содержания аминокислот в крови, а также одновременное накопление азотистых компонентов в крови и моче.
Оформление работы.
Записывают принцип метода. Фиксируют результаты, делают вывод.
Лабораторная работа
«Определение уровня остаточного азота крови по методу Аселя»
Остаточный азот сыворотки составляют низкомолекулярные азотсодержащие вещества, оставшиеся в фильтрате после осаждения белков. Основными фракциями остаточного азота являются мочевина (не менее 50%), аминокислоты (≈25%), креатин и креатинин (≈7,5%), полипептиды, нуклеотиды и азотистые основания (≈5%), мочевая кислота (≈4%), аммиак и индикан (≈0,5%) и другие (билирубин, холин). Для клинических наблюдений более информативным является определение отдельных азотистых фракций.
Принцип. Сжигание небелкового фильтрата с концентрированной серной кислотой дает переход азота органических веществ в сульфат аммония, который с реактивом Несслера образует продукты желто-оранжевого цвета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации азота.
Материал исследования. Цельная кровь
Реактивы.1) 10% трихлоруксусная кислота, 2) перекись водорода, 3) 30% и конц. H2SO4, 4) реактив Несслера (щелочной раствор йодистых солей ртути и калия), 5) стандартный раствор NH4SO4 (26 ммоль/л), 6) 5% раствор NaOH, 7) лакмус.
Проведение анализа.
Подготовительный этап (выполняет лаборант) – приготовление минерализата:
1) Осаждение белков: в центрифужную пробирку, содержащую 1,8 мл дистиллированной воды, вносят 0,2 мл крови, приливают 1,0 мл 10% ТХУ и центрифугируют (или фильтруют через смоченный бумажный фильтр).
2) Минерализация: 1,0 мл надосадка (или фильтрата) переносят в термостойкую пробирку, приливают 3 капли конц. H2SO4 и 3 капли Н2О2. Осторожно упаривают и нагревают до получения бесцветного минерализата. Студенты получают минерализат и продолжают работу.