 |
|
Метод серийных разведений
Данным методом определяют минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) антибиотика рост исследуемой культуры бактерий. Вначале готовят основное раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл ил] ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят во последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждом; разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащие 106-107 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульон и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37°С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнение питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации антибиотика.
| Номер пробирки | Разведение антибиотика | концентрация антибиотика, мкг/мл | Исследуемая культура, мл | рост бактерий (помутнение среды) |
| 1:100 | 0,1 | - | ||
| 1:200 | 0,1 | - | ||
| 1:400 | 0,1 | - | ||
| 1:800 | 12,5 | 0,1 | - | |
| 1:1600 | 6,25 | 0,1 | + | |
| 1:3200 | 3,12 | 0,1 | + | |
| 1 мл бульона без антибиотика | 0,1 | + (контроль) |
Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по таблице, которая содержит пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штаммов, а также значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.
К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.
Оценка результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методами дисков и серийных разведений
| Антибиотик | Метод дисков: диаметры зон задержки роста на среде АГВ (агар Гурьева-Васильева) | Метод серийных разведений: минимальная ингибирующая концентрация мкг/мл | |||
| Устойчивые | Умеренно устойчивые | Чувстви- тельные | Устойчивые | Чувстви- тельные | |
| Бензилпенициллин | ≤ 20 | 21-28 | ≥ 29 | - | ≤ 0.1 |
| Ампициллин | ≤ 20 | 21-28 | ≥ 29 | - | ≤ 0.2 |
| Карбенициллин | ≤ 14 | 15-18 | ≥ 19 | ≥ 32 | ≤ 16 |
| Метициллин | ≤ 13 | 14-18 | ≥ 19 | - | ≤ 3 |
| Оксациллин | ≤ 15 | 16-19 | ≥ 20 | - | ≤ 3 |
| Цефалексин | - | - | - | ≥ 32 | ≤ 10 |
| Цефалотин | ≤ 14 | 15-18 | ≥ 19 | ≥ 32 | ≤ 10 |
| Стрептомицин | ≤ 16 | 17-19 | ≥ 20 | ≥ 15 | ≤ 6 |
| Неомицин | ≤ 12 | 13-16 | ≥ 17 | - | ≤ 10 |
| Канамицин | ≤ 14 | 15-18 | ≥ 19 | ≥ 25 | ≤ 6 |
| Мономицин | ≤ 13 | 14-17 | ≥ 18 | - | ≤ 10 |
| Гентамицин | ≤15 | ≥ 16 | ≥ 6 | ≤ 4 | |
| Тетрациклин | ≤ 16 | 17-20 | ≥ 22 | ≥ 12 | ≤ 2 |
| Эритромицин | ≤ 17 | 18-21 | ≥ 22 | ≥ 8 | ≤ 2 |
| Линкомицин | ≤ 19 | 20-23 | ≥ 24 | ≥ 8 | ≤ 2 |
| Левомицетин | ≤ 15 | 16-18 | ≥ 19 | ≥ 16 | ≤ 8 |
| Рифампицин | ≤ 12 | 13-15 | ≥ 16 | ≥ 8 | ≤ 2 |
| Полимиксин | ≤ 11 | 12-14 | ≥ 15 | ≥ 50 Ед/мл | - |
| Ристомицин | ≤ 9 | 10-11 | ≥ 12 | - | ≤ 5 |