 |
|
Тесты аля исслелования фибринолитической системы
■
.■ .. ■ ■
Основным функциональным ферментом фиб-ринолиза является плазмин. При лизисе фибрино-вого сгустка плазминоген и его активаторы фиксируются на фибрине, где идет активное расщепление субстрата, тогда как в плазме фибринолиз слабо выражен, плазмин блокирован а2-антиплаз-мином.
Спонтанный эуглобулиновый лизис
Спонтанный эуглобулиновый лизис - традиционный метод оценки фибринолиза. В кислой среде при низкой температуре происходит осаждение эуглобулиновой фракции белков плазмы, содержащей фибриноген, факторы свертывания, плазминоген и его активаторы (рис. 121). Ингибиторы фибринолиза выпадают в осадок в незначительном количестве (около 2%). После растворения эуглобулиновой фракции и образования фиб-
ринового сгустка определяют время его лизиса, что отражает фибринолитическую активность плазмы. Укорочение времени лизиса эуглобулинов (активация фибринолиза) отмечается при:
• уменьшении концентрации фибриногена -
гипо- и дисфибриногенемия;
• увеличении содержания плазминогена и его ак
тиваторов - панкреатит, панкреонекроз, мета-
Рис. 121. Компоненты фибринолитической системы, которые определяют результаты метода «спонтанный эуглобулиновый лизис»
Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ
стазирующии рак предстательной железы, легкого, яичников, метастазы меланомы, операции на легких, предстательной, поджелудочной железе, гиперкатехоламинемия (стресс, тиреотоксикоз, гипертонический криз, введение адреналина), шок, патология беременности, терминальные и другие состояния, сопровождающиеся развитием ДВС-синдрома, цирроз, рак, метастатическое поражение печени (снижение ан-типлазминовой и антиактиваторной функции). Увеличение времени лизиса эуглобулинов (угнетение фибринолиза) отмечается при:
• гиперфибриногенемии;
• врожденной а-, гипо- или дисплазминогенемии;
• дефиците плазминогена и его активаторов - ре
цидивирующие венозные тромбозы, системные
васкулиты, сепсис, нефротический синдром, ги-
покоагуляционная стадия ДВС-синдрома, цир
роз печени (нарушение синтеза плазминогена).
Тест может применяться при фибринолитичес-
кой терапии для контроля эффективности лечения. Метод требует учета исходного содержания в плазме фибриногена, так как при снижении фибриногена время лизиса укорачивается, что трактуется ошибочно как гиперфибринолиз. При гиперфибриногенемии время лизиса удлиняется. Поэтому при отклонениях содержания фибриногена в плазме, а также неполноценной полимеризации фибрина и гепаринемии возможно получение ошибочных результатов. В связи с ориентировочным характером и недостаточной специфичностью в последнее время вместо теста спонтанного лизиса эуглобулинового сгустка начали использовать определение отдельных факторов фибринолиза, в первую очередь плазминогена.
Определение плазминогена
Дефицит плазминогена - один из потенциальных факторов риска тромбоза, хотя клинически это подтверждается не всегда.
При добавлении стрептокиназы (бактериальный препарат, который используется как тромбо-литик) к разведенному образцу исследуемой плазмы образуется плазминоген-стрептокиназный комплекс, который обладает ферментативной активностью и способен расщеплять хромогенный субстрат (рис. 122). Ферментативная активность комплекса плазминоген-стрептокиназа не подавляется α2-макроглобулином и α2-антиплазмином. Тесты, в которых сначала переводили плазминоген в плазмин, а затем пытались определить активность плазмина, не получились надежными, так как свободный плазмин мгновенно инактивируется α2-ан-типлазмином, присутствующим в пробе.
Определение α2-антиплазмина
α2 -антиплазмин - самый быстрый «реактивный» ингибитор плазмина, он не позволяет присутствовать плазмину в крови в свободном виде. α2 -антиплазмин, помимо плазмина, ингибирует активаторы плазминогена - урокиназу (u-РА) и тканевой активатор (t-PA). Дефицит α2-антиплазмина встречается относительно редко, но если возникает, то это сопровождается тяжелым геморрагическим синдромом, проявляющимся диапедезными кровотечениями. Основной причиной кровотечений является присутствие свободного плазмина, который разрушает все тромбы и деградирует фибриноген.
Определение α2-антиплазмина вместе с определением ингибитора тканевого активатора плазминогена типа 1 (PAI-1), XIII фактора можно рассматривать как тесты 2-го уровня, которые необходимо выполнять, если скрининговые тесты (ПВ, АЧТВ, ТВ и определение функции тромбоцитов) нормальны, а больной страдает кровотечениями.
Уменьшение содержания (активности) α2-ан-типлазмина наблюдается при:
• врожденном (наследственном) дефиците;
• заболеваниях печени (нарушается синтез α2-ан-
типлазмина);
Рис. 122. Принцип определения плазминогена хромогенным методом. СК - стрептокиназа
Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ
• ДВС-синдроме;
• лейкозах;
• нефротическом синдроме;
• интенсивной тромболитической терапии, ко
торая может вызвать потребление α2-анти-
плазмина.
После экстракорпорального кровообращения с использованием АИК может наблюдаться истощение α2-антиплазмина, что приводит к ги-перфибринолизу, сочетающемуся с истощением фибриногена, деградацией плазмином плазменных белков (в том числе факторов гемостаза), разрушением тромбоцитов и кровотечениями.
Принцип определения α2-антиплазмина подобен технологиям определения других ингибиторов (рис. 123). Так как происходит быстрая инактивация плазмина α2-антиплазмином, то стадия ингибирования и стадия измерения стартуют практически одновременно (что позволяет повысить специфичность метода при сниженной активности ингибитора в плазме).