Здавалка
Главная | Обратная связь

РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЕ СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИМ И АНТИОКСИДАНТНЫМ ЭФФЕКТАМИ



 

Изобретение относится к медицине (фармакологии, травматологии, хирургии), ветеринарии и может быть использовано в качестве средства, стимулирующего заживление кожных ран, иммунную и антиоксидантную функции организма.

Известны репаранты, стимулирующие заживление кожных ран: метилурацил, эрбисол, бепантен, декспантенол. Однако при травмах многие из них влияют только на отдельные звенья патогенеза ( РЛС - Энциклопедия лекарств, выпуск 21, 2013). В связи с этим часто приходится использовать комплексную терапию. Однако такой подход к лечению ран и травм опасен взаимодействием препаратов вследствие полипрагмазии. Одновременно с этим, многие препараты данной группы имеют побочные эффекты, которые ограничивают их применение (Белоусов Ю.Б., Моисеев B.C., Лепахин В.К. Клиническая фармакология и фармакотерапия. - М.: Универсум паблишинт, 1997, - 532 с.).

Известны также регуляторные пептиды, обладающие репаративным и ранозаживляющим действием (Курцева А.А., Влияние регуляторного пептида глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот на регенерацию кожи и функцию нейтрофилов. Автореферат дисс. канд. мед. наук, Курск, 2008, С.15, С.18). Преимуществом пептидных средств является то, что они инактивируются путем протеолиза и распадаются до обычных аминокислот, которые не являются чужеродными (ксенобиотиками) для организма, а следовательно, обладают менее выраженными, по сравнению с последними, побочными эффектами (Белоусов Ю.Б., Кукес В.Г., В.К. Лепахин В.К., Петров В.И. Клиническая фармакология Национальное руководство. – М. Гэотар-Медиа, 2009, - 965 с.).

Известен такой пептидный препарат как тимоген, представляющий собой дипептид (NH2-L-Glu-L-Trp-COOH), который является иммуномодулятором, но при этом часто используется как репарант для стимуляции заживления ран, а также для лечения травм различной этиологии ( РЛС - Энциклопедия лекарств, выпуск 21, 2013). В качестве аналога того же назначения может быть приведен пример использования тимогена для стимуляции заживления кожных ран и активации функции нейтрофилов крови (Синергичное иммунотропное и репаративное действие тимогена, даларгина и регуляторного пептида GLY-HIS-LYS при экспериментальной травме кожи / В.Ю.Чердаков, М.Ю.Смахтин, Г.М.Дубровин, И.И.Бобынцев //Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». – 2013. -№ 1. – С.38-42.). Но к недостаткам этого препарата можно отнести то, что он может быстро инактивироваться под действием протеолитических ферментов (протеаз), уровень которых особенно высок в зоне воспаления (РЛС - Энциклопедия лекарств, выпуск 21, 2013). Протеазам достаточно разрушить только одну пептидную связь между двумя аминокислотами, что обьясняет малое время полужизни этого пептида ( РЛС - Энциклопедия лекарств, выпуск 21, 2013). Поэтому этот препарат может иметь недостаточную эффективность особенно при местном применении (ссылка …Saĭdakhmedova Z.T., 2000; Reznikov K.M.??).

Все вышеперечисленное диктует необходимость поиска новых пептидных репаративных средств, обладающих более высокой биологической активностью.

Задача изобретения заключается в создании нового синтетического ранозаживляющего средства с более высокой биологической активностью.

Задача изобретения достигается тем, что в качестве ранозаживляющего средства применяют пептид, общей формулы NH2-D-ala-L-Glu-L-Trp-COOH. Благодаря введению в молекулу пептида с С-конца аминокислоты D-Ala (D-аланина) усиливается ранозаживляющая активность, вероятно потому, что введение D-аминокислот повышает их устойчивость к действию протеаз (Greven H.M., De Wied D. Influence of peptides structurally related to ACTH and MSH on active avoidance in rats // Frontiers of Hormone research. 1977, v.4, p.140-152)

Предлагаемый в качестве репаранта пептид получают путем химического синтеза из отдельных аминокислот. Пептид может быть синтезирован в любой лаборатории синтеза пептидов. Нами был использован препарат, синтезированный в НИИ химии Санкт-Петербургского государственного университета. В качестве препарата сравнения был использован тимоген, имеющий формулу NH2-L-Glu-L-Trp-COOH, который является общедоступным фармацевтическим средством и производится фирмой МБНПК ЦИТОМЕД ЗАО (Россия).

 

Выявление эффектов препарата проводили на крысах Вистар массой 180-220 грамм. Раневой процесс моделировали под хлоралгидратным наркозом (300 мг/кг внутрибрюшинно). При этом полнослойные раны стандартного размера (1 см2) наносились на холке животных (Амирасланов Ю.А., Матасов В.М., Хотинян В.Ф. Лечение ран в управляемой абактериальной среде. – М., 1981. – 157 с.).

Пептиды вводили один раз в сутки парентерально (внутрибрюшинно или внутрикожно) - тимоген в рекомендованной терапевтической дозе - 1 мкг на 1 кг массы тела (РЛС - Энциклопедия лекарств, выпуск 21, 2013)., а аналог тимогена – пептид с общей формулой(NH2-D-ala-L-Glu-L-Trp-COOH вводили в эквимолярной разовой дозе – 1,2 мкг/кг. Соответствующую навеску пептида растворяли в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия и вводили животным в обьеме 0,1 мл десятикратно (один раз в сутки) с интервалом в 24 часа между инъекциями. Последнее введение препаратов осуществляли за 12 часов до вывода животных из эксперимента. Крысам контрольной группы вводили физиологический раствор в эквивалентном объеме в течение того же периода времени.

Для оценки репаративной регенерации кожи проводили гистологическое исследование кожных ран. Материал, взятый для исследования фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина. После обезвоживания и заливки в парафин изготавливали срезы толщиной 7-10 мкм, которые затем окрашивали гематоксилин-эозином. При морфометрии на световом микроскопе Leica CME определяли процентное соотношение фибробластов и лимфоцитов в сосочковом слое кожи на 100 клеток ( Савостьянов Г.А. Основы структурной гистологии. Пространственная организация эпителиев. СПб.: Наука, 2005. 375 с.).

Для оценки иммунотропной активности определяли функцию нейтрофилов крови. Как известно нейтрофилы первыми из фагоцитов приходят в очаг воспаления и от их активности существенно зависит вероятность нагноения раны, а следовательно, длительность раневого процесса (Фрейдлин И.С, Тотолян А.А. Клетки иммунной системы. – СПб.: Наука, 2001. – 390 с). Фагоцитарную активность нейтрофилов крови исследовали после их инкубации с латексом (Медведев, А.Н. Способ исследования поглотительной фазы фагоцитоза // Лаб. дело. – 1991. – №2. – С. 19-20.), определяя фагоцитарное число (ФЧ) (среднее количество поглощенных частиц латекса на один фагоцит) в мазках, окрашенных по Романовскому. В каждом мазке просчитывали 100 нейтрофилов. (Фримель Г. Иммунологические методы. – М.: Медицина, 1987. – 472 с.) Кислородзависимую активность нейтрофилов определяли по реакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) с использованием Multiscan MC 400 (Labsystems, Финляндия) (Зинкин В.Ю., Годков М.А. Способ количественной оценки кислородзависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов человека // Клин. лаб. диагност. – 2004. – №8. – С. 26-29.).

Для выявления антиоксидантных эффектов определяли активность супероксиддиссмутазы (СОД) (Костюк В.А., Потапов А.Н., Ковалева Ж.В. (1990) Вопр.мед. химии № 2.) и уровень малонового диальдегида (МДА) в крови (Mihara, M. Thiobarbituric acid value on fuch homogenate of rat as parameter of lipid peroxidation in aging, CCl4 intoxication and vitamin E definienes / M. Mihara, M. Uchiama // Biochem. Med. – 1980. – Vol. 23, № 3. – P. 302-311.) с использованием спектрофотометра Apel 330 PD (Япония).

 







©2015 arhivinfo.ru Все права принадлежат авторам размещенных материалов.