 |
|
Определение ТГ ферментативным методом.
Принцип метода:
ТГ расщепляются под действием фермента до глицерина и жирных кислот. Глицерин подвергается дальнейшим превращениям с образованием перекиси водорода. Перекись водорода взаимодействует с реактивом с образованием окрашенных соединений, интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации ТГ.
Исследуемый материал:
1. Сыворотка крови;
2. ЭДТА – плазма (без следов гемолиза).
Реактивы:
1. Реагент № 1 буфер;
2. Реагент № 2 лиофилизат;
3. Реагент № 3 стандартный раствор ТГ.
Приготовление рабочего реагента:
Растворить содержимое одного флакона № 2 в 50 мл реагента № 1.
Ход определения:
| Реактивы (мл) | Холостая проба | Исследуемая проба | Стандартная проба |
| Рабочий реагент | 2,00мл | 2,00мл | 2,00 мл |
| Стандарт | - | - | 0,02 мл |
| Сыворотка (плазма) | - | 0,02 мл | - |
Тщательно перемешать, инкубировать 5 мин. при температуре 37ºС. Считать значение абсорбции исследуемой пробы и стандартной пробы против холостой пробы при длине волны 520 нм.
Расчет результатов:
| Dо | ||
| С = | -------------- | * Сст |
| Dст |
Сст = 2,5 ммоль/л
Нормальное значение ТГ – 0,45-1,86 ммоль/л.
Клинико-диагностическое значение:
Изменение уровня ТГ идет параллельно содержанию общих липидов и существенно зависит от характера питания.
Увеличение концентрации ТГ является одним из решающих показателей для диагностики отдельных типов генетически обусловленных нарушений липидного обмена (первичная или семейная гипертриглицеридемия).
Симптоматическая (вторичная) триглицеридемия наблюдается при:
· ожирении
· циррозе печени алкогольном, билиарном
· сахарном диабете
· гипофункции щитовидной железы
· нефротическом синдроме
· панкреатите остром и хроническом
· злоупотреблении алкоголем
· при употреблении некоторых препаратов: бета-блокаторов, диуретиков и др.
Снижение концентрации ТГ наблюдается при гипертиреозе, синдроме мальабсорбции.
БЕТА-ЛИПОПРОТЕИДЫ
Определение β-ЛП проводится по Бурштейну и Самай.
Принцип метода:
В присутствии хлористого кальция и гепарина нарушается коллоидная устойчивость белков сыворотки крови, в связи с чем осаждаются β-ЛП. По степени помутнения судят о содержании β-ЛП в сыворотке.
Материал для исследования: сыворотка крови.
Реактивы:
1. хлористый кальций 0,277%. 2,77 мл хлористого кальция 10% доводят до 100 мл дистиллированной водой.
2. 1% водный раствор гепарина. Готовится перед реакцией смешиванием 0,1 мл гепарина и 0,4 мл дистиллированной воды. Полученный раствор содержит в 1 мл 1000 ед., т.к. во флаконе 25000 ед. в 5 мл или 5000 ед. в 1 мл, а при приготовлении проведено разведение в 5 раз.
Ход определения:
Первое определение. В центрифужную пробирку вносят 2 мл хлористого кальция, приливают 0,2 мл сыворотки и тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Определяют оптическую плотность на ФЭКе при красном светофильтре (720 нм), в кювете – 5 мм против дистиллированной воды. Полученный результат записывают – D1 (обычно 0,01-0,03).
Второе определение. В кювету добавляют 0,04 мл гепарина и одновременно включают секундомер на 4 минуты. Содержимое кюветы тщательно перемешивают. Оптическая плотность возрастает. По истечении 4 минут производят повторное определение оптической плотности – D2.
Расчет:
1. В относительных единицах – D2 - D1
Норма – 0,35-0,55 или 35-55 относительных единиц.
2. В г/л
(D2 - D1) * 1,164 * 10
1,164 – стандартный коэффициент, найденный опытным путем
10 – коэффициент пересчета в системы СИ
Норма – 3-5 г/л.
Условия:
1. кровь должна быть взята строго натощак;
2. сыворотка может хранится до 2 суток в холодильнике или при комнатной температуре;
3. при высокой концентрации β-ЛП берут 0,1 мл сыворотки.
Клинико-диагностическое значение:
Изменение содержания β-ЛП происходит параллельно содержанию ХС, т.к. β-ЛП или ЛПНП являются транспортной формой ХС. Поэтому диагностическое значение β-ЛП то же, что и определение ХС и имеет значение при атеросклерозе, сахарном диабете, ожирении, гипотиреозе, заболеваниях печени и т.д.
ХОЛЕСТЕРИН
ХС представляет собой вторичный одноатомный ароматический спирт. Он обнаруживается во всех тканях и жидкостях человеческого организма, как в свободном состоянии, так и в виде сложных эфиров. ХС является важным компонентом клеточных мембран, служит предшественником образования стероидных гормонов и желчных кислот. У практически здоровых людей 2/3 ХС плазмы содержится в составе атерогенных, 1/3 неатерогенных ЛП, свободный холестерин вместе с фосфолипидами составляет основу липидной структуры плазматических и других мембран.
Не менее 10% населения страдает гиперхолестеринемией. Это может привести к серьезным патологическим изменениям сосудистой стенки. Уровень содержания ХС и ТГ являются наиболее важными показателями липидного обмена.
Существует прямая зависимость между увеличением концентрации ХС в плазме и появлением риска атеросклеротического поражения коронарных сосудов.
В норме уровень общего ХС – 3,9-5,2 ммоль/л. При концентрации ХС в диапазоне 5,2-6,5 ммоль/л рекомендуется исследовать содержание ЛПВП-ХС. Больных обследуют спустя 2-4 недели лечения без приостановки диетической и лекарственной терапии; повторяют обследование с интервалом в 3 месяца.
Материалом для исследования служит сыворотка или плазма.
Методы определения ХС многочисленны, значительное распространение получили:
· химический метод (метод Илька) – в настоящее время не используется;
· ферментативный;
· метод «сухой химии».