Главная | Обратная связь

Осаждение белков при нагревании

Принцип метода. Присутствие белков обнаруживается кипячением, так как почти все белки денатурируют при нагревании в нейтральной или слабокислой среде. Наиболее полное и быстрое осаждение белка происходит в среде, рН которой соответствует изоэлектрической точке этого белка. Для большинства белков изоэлектрическая точка соответствует слабокислой реакции (рН – около 5,0). В сильнокислых и сильнощелочных средах растворы белков при кипячении не коагулируют и могут дать осадок лишь при добавлении какой-нибудь нейтральной соли (NaCl). В этих случаях устойчивость белка в растворе зависит о приобретения положительного заряда в сильнокислой среде и отрицательного заряда в щелочной среде.

Ход работы.В 5 пробирок налить по 0.5 мл раствора белка. В 3-ю пробирку добавить 10 капель 1%-ного раствора уксусной кислоты для создания кислой среды.

В 4-ю пробирку добавить 10 капель 1%-ного раствора уксусной кислоты и 5 капель насыщенного раствора хлорида натрия.

В 5-ю пробирку добавить 5 капель 10%-ного раствора гидроксида натрия.

Все пробирки прокипятить. После кипячения во 2-ю пробирку добавить 1-2 капли 1%-ного раствора уксусной кислоты.

Оформление работы.Записать в таблицу результаты осаждения белка при нагревании. Отметить появление осадка плюсом, а отсутствие – минусом и указать в каждом случае причины появления или отсутствия осадка белка.

Осаждение белков концентрированной азотной кислотой (проба Геллера)

Принцип метода. Выпадение белка в осадок при действии некоторых минеральных кислот связано с дегидратацией белковых частиц и образованием комплексных солей белка с кислотами.

В избытке всех минеральных кислот за исключением азотной, выпавший осадок белка растворяется. Реакция осаждения белков азотной кислотой поэтому используется в качестве пробы на присутствие белка при клинических исследованиях мочи (проба Геллера). Эта проба («кольцевая проба») считается положительной , если на границе соприкосновения двух жидкостей – концентрированной азотной кислоты и анализируемого образца появляется белое кольцо денатурированного белка. Проба дает положительный результат при содержании белка в анализируемом образце выше 0,0033% . Ниже этой концентрации проба отрицательна. Йоган Флориан Геллер (1813-1871) – австрийский врач, впервые использовавший химические методы при анализе мочи у больных людей, по праву считается основоположником клинической химии.

Ход работы.К 1мл концентрированной азотной кислоты осторожно по стенке пробирки, наклонив ее под углом 45° так, чтобы обе жидкости не смешивались, наслоить равный объём раствора белка.

На границе двух жидкостей образуется осадок в виде белого кольца.

Результат:

Вывод: