 |
|
Лабораторная работа
1. Определение мочевой кислоты в сыворотке крови
| Оборудование: | 1. | Штатив с пробирками. |
| 2. | Пипетки на 1 мл и 2 мл. | |
| 3. | КФК. | |
| 4. | Кюветы на 0,5 см. | |
| 5. | Центрифуга. | |
| Реактивы: | 1. | 20% раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ). |
| 2. | Насыщенный раствор соды. | |
| 3. | Реактив Фолина (фосфорно-вольфрамовый реактив). | |
| 4. | Дистиллированная вода. | |
| 5. | Сыворотка крови. | |
| 6. | Разведенная в 50 раз моча. |
Принцип метода. Мочевая кислота восстанавливает фосфорно-вольфрамовый реактив с получением окрашенных продуктов синего цвета. Интенсивность окраски определяют колориметрически.
Ход работы. В центрифужную пробирку наливают 1 мл сыворотки, 1 мл дистиллированной воды и 1 мл 20% раствора ТХУ. Перемешивают и через 15 мин центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин. В чистую пробирку наливают 1,5 мл прозрачного центрифугата, 0,7 мл насыщенного раствора соды и 1 каплю реактива Фолина (фосфорно-вольфрамовый реактив). Через 10 мин пробу колориметрируют при зеленом светофильтре в кювете толщиной 0,5 см против воды.
Концентрацию мочевой кислоты определяют по калибровочному графику.
2. Определение мочевой кислоты в моче
Проводится так же, как в сыворотке, только вместо центрифугата сыворотки в пробу добавляют 1,5 мл мочи, разведенной в 50 раз. Содержание мочевой кислоты в пробе определяют по калибровочному графику и используют для расчета количества мочевой кислоты, выделяемого с мочой за сутки.
Расчет проводят по формуле: А х 0,075 = г/сутки, где
А – количество мкг мочевой кислоты, определенной по графику;
0,075 – коэффициент пересчета, переводящий мкг мочевой кислоты в г с учетом количества суточной мочи.
Нормальное содержание мочевой кислоты в сыворотке крови – 0,12-0,46 ммоль/л. С мочой за сутки выводится 0,4-1 г мочевой кислоты.
Диагностическое значение определения мочевой кислоты
Повышение содержания мочевой кислоты в крови наблюдается при нарушении ее выделения из организма (заболевания почек, ацидоз, токсикоз беременности) и повышенном распаде нуклеопротеидов (некоторые гематологические заболевания, прием пищи, богатой пуринами).
Понижение мочевой кислоты в крови наблюдается при гепатолентикулярной дегенерации, в некоторых случаях акромегалии, у больных анемией после приема пиперазина, атофана, салицилатов, дикумерола и АКТГ.
В моче содержание мочевой кислоты возрастает при лейкемии, истинной полицитемии, терапии кортизолом или АКТГ, а также при гепатолентикулярной дегенерации.
Проверка качества усвоения знаний (конечный уровень)
А) Вопросы для защиты лабораторной работы
1. На чем основан метод определения мочевой кислоты?
2. При каких заболеваниях повышается концентрация мочевой кислоты в сыворотке крови и усиливается ее выделение с мочой?
3. Когда наблюдается понижение мочевой кислоты в крови?
4.Оцените результаты, полученные при проведении лабораторной работы.
5. Какие лекарственные препараты вызывают снижение мочевой кислоты в сыворотке крови?
6. Как пользоваться калибровочным графиком?
7. Каково содержание мочевой кислоты в сыворотке крови и моче здорового человека?
8. Назовите азотистые основания, катаболизм которых приводит к образованию мочевой кислоты?