Здавалка
Главная | Обратная связь

Методи діагностики протозойних хвороб тварин.



ЗАВДАННЯ № 1. Вивчити основні методи зажиттєвої діагностики протозоозів тварин.

Оволодіти методикою підготовки предметних скелець, технікою взяття крові, приготування тонкого мазка крові та товстої краплі, одержання пунктату з лімфатичних вузлів для мікроскопічного дослідження, вивчити особливості фіксації мазків крові, їх фарбування, зазначення дати виготовлення, способи збереження та транспортування. Оволодіти особливостями взяття та підготовки матеріалу для мікроскопічного дослідження. Вивчити методи фарбування тонких мазків крові за Романовським-Гімза, Нохтом, Лейшманом, Мошковським. Оволодіти методом фарбування товстої краплі крові, приготування та дослідження роздавленої краплі, методику дослідження фекалій від підозрілих в захворюванні тварин еймеріозом, методом флотації за Фюллеборном, або Котельниковим-Хреновим.

Підготовка предметних скелець. Скельця кип'ятять в мильній воді 30 хвилин. Після чого старанно промивають в чистій воді і насухо витирають. Зберігають готові скельця у спирті, або спирт-ефірі в банці з притертою кришкою. Перед використанням скельця протирають.

Приготування тонкого мазка. Кров у домашніх тварин беруть з вушної вени, або вени кінчика хвоста, у птиці - з гребеня або сережок. Місце взяття крові обробляють (вистригають шерсть, протирають спиртом), вену проколюють стерильною голкою. Для дослідження беруть перші краплі крові, в яких, як правило, найбільше паразитів. Предметним склом доторкуються до краплі крові і під кутом 45° швидко проводять по скельцю. Мазок висушують 10 хв на повітрі і фіксують. На висушеному мазку роблять підпис (номер, кличка, дата і місце взяття).

Підготовка товстої краплі. Краплину крові наносять на предметне скло і розмазують за допомогою другого предметного скельця, після чого мазок висушують на повітрі.

Дослідження матеріалу з лімфатичних вузлів. Дослідження пунктату з лімфатичних вузлів проводиться при підозрі тварин на тейлеріоз. Поверхневий лімфатичний вузол фіксують, місце проколу протирають спиртом. Потім вводять стерильну голку і за допомогою шприца відсмоктують невелику кількість лімфи. Із отриманого пунктату готують тонкий мазок, фіксують та фарбують.

Фіксація мазків. Висушені мазки фіксують в чистому метиловому або етиловому спирті (90-96% протягом 5 хвилин, або в суміші спирт-ефіру в однакових частинах протягом 10-15 хвилин. Мазки в спирті не повинні дотикатися один до одного.

Метод фарбування за Романовським – Гімза. Для приготування розчину беруть 1-2 краплі основного розчину на 1 мл. води. При фарбуванні розчин підливають під препарат, для чого препарат розміщують на спеціальних паличках мазком вниз. Фарбують від 20 хвилин до 1 години. Потім мазки промивають водою, висушують і досліджують під мікроскопом.

Метод Нохта. Фарбують мазки азуром і еозином. Суху фарбу, кожну окремо, розчиняють (1:1000) в дистильованій воді, зберігають в банках із темного скла. Для приготування робочого розчину беруть 1 частину еозину, 2 частини азуру і З частини води, фарбують протягом 4 годин, промивають водою, висушують і досліджують під мікроскопом.

Метод Лейшмана. Передчасно мазки не фіксують. Суху фарбу 0,15 г. розчиняють в 100 мл. метилового спирту. На мазки наносять 10-15 краплин фарби на 3 хвилини. Потім добавляють стільки ж краплин води. Все це змішують паличкою і залишають на 5-15 хвилин. Після чого мазок промивають, висушують і досліджують під мікроскопом.

Метод Мошковського. Основний розчин: метиловий спирт - 1 ч., бура - 2,5 ч.,. вода - 100 мл. Суміш кип'ятять, охолоджують, фільтрують і розводять у 8-10 разів водою.

2,5-10% розчин таніну фільтрують, добавляють кілька кристалів тимолу або камфори. Препарати занурюють в перший розчин на 5-10 сек., промивають у воді. Потім на 2-5 с. занурюють в розчин таніну і знову промивають водою, висушують і досліджують під мікроскопом.

Фарбування товстої краплі крові. Не фіксований мазок занурюють в фарбу (1% розчин метилового синього – 4г., 1% розчин оцтової кислоти - 4 г, дистильованої води - 40 мл) на 15 хвилин. Після чого фарбу обережно зливають, мазок висушують і досліджують під мікроскопом.

Приготування та дослідження роздавленої краплі. Цей метод використовується для спостереження за найпростішими в живому стані. При трипаносомозі кожну краплю крові

наносять на чисте предметне скло і накривають покривним. Краплі крові не повинні виходити за краї покривного скла. При трихомонозі великої рогатої худоби досліджують краплину змиву, або виділень з статевих органів, сперму. Препарат не фарбують, а досліджують в затемненому полі мікроскопу.

Дослідження фекалій тварин методом флотації за Фюллеборном.10-20 г. фекалій кладуть у склянку, розмішують за допомогою палички в насиченому розчині кухонної солі (400 г. солі на 1 л. води). Відношення розчину солі до фекалій повинно бути 20:1. Рідину фільтрують через металеве сито і відстоюють протягом ЗО хвилин. Потім за допомогою металевої петлі знімають з верхнього шару рідини 3 краплі, розміщують їх на предметне скло для мікроскопії.

Стандартизована методика флотації з розчином нітрату амонію за Котельниковим – Хреновим.Пробу фекалій 3 г кладуть у склянку, заливають невеликою кількістю свіжого розчину нітрату амонію (1500г на 1 л води) і старанно розмішують паличкою. При помішуванні добавляють розчин порціями до об'єму 50 мл. Великі частини, які спливають на поверхню розчину, збирають за допомогою палички або паперу. Потім рідину фільтрують через чисте сито у другу склянку. Можна в першу склянку налити небагато розчину і, сполоснувши її, пропустити через фільтр в другу склянку. В результаті цього кількість виявлених ооцист збільшується. Профільтровану рідину залишають у спокої на 15-20 хв. Потім металевою петлею знімають 3-4 краплі з різних місць рідини і переносять на предметне скло для мікроскопії при малому збільшенні длязнаходження ооцист кокцидій, цист балантидій. Металеву петлю перед дослідженням кожної проби фламбують або послідовно промивають водою в двох склянках (воду в склянках міняють після дослідження 50 проб).

Щоб не допустити швидкого висихання та кристалізації крапель на предметних скельцях в теплий період року і при низькій вологості, а також в тому випадку, коли готують велику кількість препаратів для дослідження, до кожної краплі, знятої з поверхні рідини, добавляють краплину гліцерину, розведеного водою 1:1. При наявності навиків можна мікроскопувати поверхню усієї площі рідини в склянці за допомогою МБС.

Оволодіти клінічними прийомами та навиками по протозоології . Відбір, фарбування та дослідження мазків крові при піроплазмозах. Проведення масових копрологічних обстежень тварин на кокцидіози. Техніка збору та пересилки матеріалу для лабораторного дослідження при підозрі на протозоози. Виписування рецептів лікарських препаратів, які застосовуються для лікування і профілактики протозойних хвороб. Порядок ведення історії хвороби тварини при інвазійних хворобах. Техніка задавання хімічних препаратів та проведення обробок тварин при інвазійних хворобах. Розробка комплексу оздоровчих заходів у господарствах при інвазійних хвороб.

ЗАВДАННЯ 2:Посмертна діагностика протозойних хвороб.

Патологоанатомічні зміни в органах при цілому ряді протозойних хвороб (бабезіоз, тейлеріоз та ін.) дуже специфічні, тим більш вирішальним у постановці діагнозу є виявлення збудника в трупі. Багато найпростіших в трупі зберігаються недовго. Трипаносоми, бабезії та інші збудники через деякий час зазнають морфологічних змін – втрачають свою характерну форму та будову і протягом 20-30 годин лізуються. При температурі 2-5° вони зберігаються довше. Зважаючи на це, необхідно готувати препарати із свіжого трупу (селезінки, печінки, серця та інших органів). Якщо труп не свіжий, матеріал для дослідження беруть із судин (капілярів шкіри біля копит або вушних раковин). Мазки фіксують та фарбують як завжди.

Зміни в трупі часто розвиваються в закономірній послідовності. Наприклад, в трупах коней, які загинули від бабезіозу, паразити (Вавеsіа саbаllі) втрачають характерну форму: парні грушоподібні паразити спочатку приймають овальну форму, потім закруглену. По мірі зміни форми змінюється і величина бабезій, вони постійно зменшуються. Якщо характерна грушоподібна форма досягає довжини 3,5 мкм, то в трупі їх навіть важко помітити під мікроскопом (до 0,2 мкм). Балантидії вже через 5-6 годин після загибелі тварин лізуються. Трихомонади в патологічному матеріалі залишаються життєздатними при температурі 37° протягом 1-3 днів, при 10° - 1-7 днів, при 0-2° - до 18 днів. Кокцидії зберігаються в трупі довше, але краще використовувати свіжий матеріал. Від курчат, ягнят не пізніше першої доби після смерті досліджують кал та зскрібки із уражених місць кишечника на виявлення ооцист. У кролів, крім кишечника, зскрібки беруть ще й з печінки.


Збір, фіксація та пересилка патологічного матеріалу при протозойних хворобах. Мазки крові на піроплазмідози, трипаносомози та інші хвороби пересилають в твердій упаковці (ящик з фанери або дощок). Перед цим мазки висушують та фіксують. Від кожної тварини мазки загортають окремо в чистий папір.

Матеріал на трихомоноз, зібраний від корів, абортованих плодів та бичків краще досліджувати на місці, в господарстві. При відсутності такої можливості одержаний матеріал рекомендують поміщати в штучне середовище В. А. Акатова ( 20 мл водяного 2,3%-ного розчину лимоннокислого натру та 20 мл білка курячого яйця). Перед застосуванням суміш збовтують, потім по 5 мл розливають у пробірки і в кожну добавляють по 1 мл матеріалу, взятого від тварини для дослідження. В цьому середовищі при температурі від 3 до 25° трихомонади залишаються живими 5-35 днів, тоді як в матеріалі від хворої тварини вони живуть 1-10 днів.

При еймеріозі курей краще відправляти трупи, від дрібної та великої рогатої худоби - кал, зскрібки або уражені місця кишечника. З цією метою відрізають декілька сантиметрів кишки з вмістом і перев'язують обидва кінці. Від кроля, крім кишечника, необхідно надсилати і уражену печінку. Матеріал потрібно фіксувати в 10%-вому розчині формаліну і пересилати в добре закритій банці або іншій посудині,

На балантидіоз свиней, гістомоноз птиці дослідження краще проводити в господарстві, так як збудники цих хвороб в патологічному матеріалі швидко руйнуються.







©2015 arhivinfo.ru Все права принадлежат авторам размещенных материалов.