 |
|
Обобщенная схема диагностики бактериальных менингитов.
Сбор и доставка патологического материала
Для микробиологической диагностики бактериальных менингитов используют спинномозговую жидкость (СМЖ), кровь, носоглоточную слизь, соскоб из геморрагических элементов сыпи, секционный материал. Наиболее часто для бактериологического анализа используется спинномозговая жидкость, взятая при люмбальной пункции или пункции боковых желудочков мозга. Взятие СМЖ проводят как можно раньше, желательно до начала антибактериальной терапии.
Взятие СМЖ производит врач. Проба отбирается со строгим соблюдением правил асептики. Свежевзятый ликвор из шприца без иглы над спиртовкой вносят в стерильную, желательно центрифужную пробирку в количестве 1-2 мл. Ликвор для исследования немедленно доставляют в лабораторию, где тотчас, пока СМЖ тёплая, её подвергают анализу, т.к. некоторые микроорганизмы, например, N. meningitidis, при охлаждении погибают. При отсутствии такой возможности материал сохраняют при 37°С в течении нескольких часов. Для пересылки материала используют изотермальные ящики, грелки, термос или любую другую упаковку, где поддерживается температура около 37°С.
1. этап
Микроскопия исследуемого материала.
СМЖ центрифугируют 5 минут при 3000 об/мин и из осадка делают мазки. Если присланная жидкость мутная, мазки готовят без центрифугирования. При исследовании ликвора с неопределённым возбудителем или на менингококк мазки после высушивания фиксируют на пламени и Мазки окрашивают метиленовым синим и по Граму в модификации Калины. В окрашенных мазках могут быть обнаружены грамотрицательные диплококки или одиночные кокки, грамотрицательные палочки или грамположительные кокки..
2. этап
Посев исследуемого материала
Так как гнойные менингиты имеют различную этиологию, то при исследовании СМЖ с неопределённым возбудителем необходимо производить посев ликвора на несколько питательных сред с целью выделения более широкого спектра возбудителей.
Питательные среды для первичного посева.
1. Сывороточный агар
2. 5% кровяной агар
3. Среда для контроля стерильности
4. Агар с гретой кровью (шоколадный агар)
5. Простой агар
6. Полужидкий агар для обогащения ликвора, приготовленный на бульоне из перевара Хоттингера или рыбного гидролизата.
Культивирование
Проводят посев 2-4 капель гнойного ликвора или ресуспензированного осадка на чашку со свежеприготовленным сывороточным агаром, на чашку с кровяным агаром, простым агаром, на среду для контроля стерильности. Капли материала слегка растирают подогретым шпателем на поверхности агара. После этого одну чашку с простым агаром помещают в термостат в обычной атмосфере при 37°С, а две другие инкубируют при повышенной концентрации СО2. Для этого чашки помещают в эксикатор, в котором создаётся повышенное содержание СО2 за счёт горящей свечи. Инкубация при повышенных концентрациях СО2 способствует выявлению патогенных нейсерий, пневмококков, листерий и др. При подозрении на H. influenzae производят посев на чашку с шоколадным агаром.
В пробирку, к оставшемуся от посева и микроскопирования осадку, добавляют 5 мл стерильного 0,1% полужидкого агара и помещают в термостат для накопления.
Этап
На второй день просматривают сделанные накануне посевы СМЖ. При появлении роста на плотных питательных средах изучают характер роста, морфологию выросших бактерий при окраске по Граму.
У бактерий, выросших на плотных питательных средах, определяют чувствительность к антибиотикам, а также проводят отсевы на элективные среды для получения чистой культуры с последующей их идентификацией.
При отсутствии роста колоний на твёрдых питательных средах делают высев из среды накопления на чашку с сывороточным агаром и КА.
Твёрдые среды с посевами ликвора при отсутствии роста на протяжении 24 часов надо инкубировать в течение 3-6 дней. При отрицательных результатах высевы повторяют через 8-10 дней.