Главная | Обратная связь

Диагностика менингококковой инфекции.

Она основана на бактериологическом исследовании патологического материала, выделении чистой культуры и биохимической идентификации возбудителя. Материалом для исследования могут быть спинномозговая жидкость, кровь, отделяемое носоглотки. Следует помнить, что в мазках СМЖ очень трудно обнаружить микроб, так как менингококки склонны к аутолизу. Для бактериоскопического исследования мазки готовят из СМЖ, из крови при менингококкцемии, из соскобов сыпи при генерализованной форме. Мазки окрашивают метиленовым синим и по Граму. В окрашенных мазках обнаруживают грамотрицательные диплококки или одиночные кокки.

Для выделения возбудителя материал высевают на твердые или полужидкие питательные среды, содержащие сыворотку, кровь или асцитическую жидкость. Посевы инкубируют при 37ºC в присутствии СО2 от 3 до 10%. Время инкубации – 24час. Через 24 часа рассматривают колонии и отбирают оксидазаположительные, что является ориентировочным указанием на принадлежность к роду нейссерий. Идентификацию чистой культуры проводят по ферментации только глюкозы и мальтозы до кислоты и агглютинации группоспецифическими сыворотками.

При выявлении случая острого гнойного менингита менингококковой этиологии окружавшие больного лица обследуются на носительство менингококка в носоглотке. Это, прежде всего лица с явлениями назофарингита и здоровые, тесно контактировавшие с заболевшим. На бактерионосительство обследуется и сам больной перед выпиской из больницы. Материалом служит носоглоточная слизь. Ее берут осторожно изогнутым тампоном с задней стенки глотки, используя шпатель для языка. Мазок следует за 2 часа до еды. Материал здесь же засевают на подогретые и подсушенные чашки Петри со средой, содержащей сыворотку. Оптимальным методом является одновременное использование двух вариантов сывороточного агара: вначале материал растирают на ½ или ¼ чашки со средой, содержащей 5мкг/мл линкомицина для подавления грамположительной флоры, затем тем же тампоном материал засевают на сектор другой чашки с той же средой, но без антибиотика. Если возможности ограничены, то используют только среду с антибиотиками. Чашки доставляют в лабораторию в утепленном состоянии и немедленно помещают в термостат при 37ºС.После 22-24час инкубации посевов носоглоточной слизи их просматривают и отбирают колонии, подозрительные на менингококк – бесцветные, слегка голубоватые в проходящем свете, почти прозрачные, с ровными краями, плоские, влажные, диаметром ≈1-2мм. Их отсевают на 20% сывороточный агар и инкубируют в термостате в присутствии СО2.

На агаре с первичным посевом слизи носоглотки всегда имеется рост представителей рода нейссерий – нормальных обитателей носоглотки человека. Морфологически все нейссерии очень похожи, и представляют собой грамотрицательные кокки с тенденцией образования пар или тетрад. В этом случае важнейшее значение имеет признак пигментообразования. Менингококк никогда не образует пигмента, а многие виды непатогенных нейссерий его образуют. Желтый, кремовый или желто-зеленый пигмент непатогенные нейссерии могут образовывать если не в 1 сутки, то на 2 сутки инкубации. Для более четкого выявления пигментообразования можно использовать сывороточный агар с 10% куриного желтка на физиологическом растворе. Пигментообразование на такой среде четко выявляется уже через 24час.

Чистые культуры, полученные из отсеянных колоний, подозрительных на менингококковые, идентифицируют по морфологическим (в мазках по Граму/Калине), культуральным, ферментативным свойствам. Из культуральных признаков, имеющих главенствующее значение в плане дифференциации с не образующими пигмент грамотрицательными кокками, необходимо учитывать:

· неспособность менингококка расти на средах без добавления сыворотки;

· неспособность менингококка расти в присутствии 0,2% желчи;

· неспособность менингококка расти при 22 С.

Сахаролитические свойства. Для определения сахаролитических свойств лучше всего использовать среды Хью-Лейфзона с уменьшенным содержанием пептона и строгим сбалансированием среды. Менингококк разлагает только глюкозу и мальтозу до кислоты.

Свежие изоляты менингококка подлежат серологическому группированию, однако, большинство ''носоглоточных'' штаммов не имеют капсул и поэтому не агглютинируются.

Из носоглоточной слизи, мокроты здоровых, а иногда и при ОГМ из ликвора выделяется близкая к нейссериям моракселла, подрод бранхамела—Moraxella catarrhalis. Морфологически это также грамотрицательные кокки. На агаре растет в виде круглых, выпуклых, беловатых колоний диаметром 1,5-2мм. Ее отличает от менингококка уже то, что она растет на МПА без сыворотки, ее рост не зависит от присутствия СО2, Она биохимически полностью неактивна.

В редчайших случаях из носоглотки выделяется Neisseriae gonorrhoeae. Колонии гонококка очень сходны с колониями менингококка, их отличают только биохимические свойства – они не гидролизуют мальтозу.

Бактериологическое исследование крови при ОГМ.

Развитию ОГМ всегда предшествует бактериемия. Нередко она носит кратковременный характер, но иногда переходит в септицемию. При менингококковом сепсисе возбудитель можно выделить не только из крови, но и из некротических кожных поражений – элементов сыпи. При массивной менингококкцемии бактериальные клетки можно выявить микроскопически в препарате толстой капли крови, окрашенной метиленовым синим. По некоторым данным литературы, таким же методом можно выявить пневмококк и гемофилы при тяжелых генерализованных формах инфекции.

Наиболее надежным является метод гемокультуры. 5-10мл стерильно взятой крови из вены засевают во флаконы с 50-100мл полужидкого агара. Посевы инкубируют в термостате в течение недели, периодически делая из него высевы. Первый высев через 24 часа производят на 3 чашки с различными средами: МПА, 20%-сывороточный агар, ША. Выросшие на пластинчатых средах колонии далее идентифицируют по уже известной схеме.

Серологическая диагностика менингококкового менингита проводится с использованием РНГА, ИФА. В качестве антигенного диагностикума используют капсульные антигены менингококка. Антитела к ним появляются к 5-7 дню болезни и сохраняются в повышенных титрах в течение 2-3 недель. Для ОГМ другой этиологии такие реакции не используются.