Главная | Обратная связь

Наиболее используемые питательные среды

В бактериологической практике

 

В бактериологической практике чаще всего используются сухие питательные среды, которые получают в промышленных масштабах – триптические гидролизаты дешевых непищевых продуктов (рыбные отходы, мясокостная мука, технический казеин) и питательный агар. Сухие среды могут храниться в течение длительного времени, удобны при транспортировке и приготовлении, имеют относительно стандартный состав.

Вопросы для самоконтроля

1 Определите понятие «питательные среды».

2 Какие требования предъявляют к составу питательных сред?

3 Поясните на примерах классификацию питательных сред.

4 Какие вещества используются для получения твердых сред?

5 Почему агар является наиболее используемым уплотнителем при приготовлении плотных сред?

6 Перечислите наиболее распространенные питательные среды в бактериологической практике, охарактеризуйте их.

 

Практическое занятие 1

Цель: ознакомление с наиболее часто употребляемыми питательными средами, их составом, назначением, техникой приготовления.

 

Оборудование и материалы: дистиллированная вода, электрическая плитка, мерные цилиндры, весы, шпатель, стерильные колбы на 250 мл с ватными пробками, хозяйственная руковица, сухие питательные среды разного состава, стерильные чашки Петри, спиртовка, спички, чашки Петри с питательной средой.

Ход работы

 

1 Изучить составы ниже приведенных питательных сред, записать в рабочую тетрадь название сред и их составы. Охарактеризовать каждую из них согласно классификации: по составу, назначению, консистенции; указать условия культивирования микроорганизмов на каждой из сред?

 

Среда 1, (г/л): Na₂HPO₄ – 24, KH₂PO₄ – 12, NaCl – 2, NH₄Cl – 4, глюкоза – 10, pH – 7,2.

Среда 2, (г/л): Na₂HPO₄ – 24, KH₂PO₄ – 12, NaCl – 2, NH₄Cl – 4, глюкоза – 10, цистеин – 0,01, агар – 15, pH – 7,2.

Среда 3. Среда М 9 (основа для культивирования почвенных бактерий), (г/л): Na₂HPO₄ – 24, KH₂PO₄ – 12, NaCl – 2, NH₄Cl – 4, pH – 7,2.

Среда 4,(г/л):Na₂ HPO₄ – 24, KH₂ PO₄ – 12, NaCl – 2, NH₄Cl – 4, гидролизат казеина – 10, дрожжевой экстракт – 5, pH – 7,2.

Среда 5,(г/л): пептон – 5, мясной экстракт – 5, бромкрезоловый пурпурный 1,6% раствора – 0,625 мл, крезоловый красный 0,2% раствора – 2,5 мл, глюкоза – 0,5 г, пиридоксаль – 0,5, рН среды – 6,0.

Среда 6.Среда Эшби (концентрированная) для культивирования азотфиксирующих микроорганизмов, (г/л): KH₂PO₄ – 2, NaCl – 2, K₂SO₄ – 1, MgSO₄ – 2, CaCO₃ (мел) – 50, маннит – 200, pH – 7,2.

Среда 7.Мясопептонный бульон (для культивирования широкого круга микроорганизмов), (г/л): мясная вода, NaCl – 0,5 %.

Среда 8. Картофельная среда (в основном для культивирования спорообразующих бактерий), (г/л): картофель, мел – на кончике ножа.

Среда 9. Среда (для выделения актиномицетов), (г/л): крахмал растворимый – 20, КNО₃ – 1, К₂НРО₄ – 0,5, MgSO₄ x 7Н ₂O – 0,5, NaCl – 0,5, FeSO₄ – следы, вода водопроводная, рН 7,2–7,3.

Среда 10. Для выделения культур Clostridium,(г/л): КН₂РО₄ – 0,5, К₂НРО₄ – 0,5, MgS0₄ – 0,5, NaCl – 0,5, вода водопроводная, глюкоза – 20, пептон – 5, CaCO₃ – 10, рН – 7,0.

Среда 11. Для выделение микроорганизмов, растворяющих фосфаты кальция, (г/л): глюкоза – 10, аспарагин – 1, К₂SО₄ – 0,2, МgSО₄ x 7H₂O – 0,2, дрожжевой экстракт – 0,02, агар – 15, вода водопроводная.

Среда 12. Выделение культур микобактерий, (г/л): NН₄С1 – 0,5, К₂НРО₄ – 0,5, МgSO₄ – 0,2, СаСО₃ – 0,2, вода водопроводная.

Среда 13. Выделение культур лактобацилл, (г/л): гидролизат казеина – 10, мясной экстракт – 10, дрожжевой экстракт – 5, глюкоза – 20, ацетат натрия – 5, цитрат аммония – 2, К₂НРО₄ – 2, МgSO₄ – 0,2, MnCl₂ x 4H₂O – 0,05, вода дистиллированная.

Среда 14. среда Гиса, (г/л): пептон – 10, NаС1 – 5, K₂HPO₄ – 10, индикатор Андреде – 1% или бромкрезоловый пурпурный – 1,6%, агар – 5, вода дистиллированная, рН – 7,2.

Среда 15, (г/л):Na₂ HPO₄ – 24, KH₂ PO₄ – 12, NaCl – 2, NH₄Cl – 4, гидролизат казеина – 10, дрожжевой экстракт – 5, агар – 20, pH –7,2.

2 Приготовить 150 мл плотной питательной среды.

Последовательность приготовления питательной среды с использованием сухого питательного агара следующая:

2.1 Налить в 250-мл стерильную колбу 150 мл дистиллированной воды.

2.2 Взвесить нужное количество питательной среды (5 г из расчета на 100 мл).

2.3 Засыпать сухой питательный агар в холодную воду.

2.4 Тщательно размешать. Закрыть колбу ватной пробкой, соблюдая приемы поддержания стерильности.

2.5 Поставить колбу со средой на электрическую плитку. Довести среду до полного растворения агара, не допуская его пригорания.

2.6 Простерилизовать среду.

2.7 Остудить среду до 45 °С.

2.8 С соблюдением приемов стерильности разлить среду по 25 мл в стерильные чашки Петри.

2.9 Дать застыть агаризованной среде.

 

 

 

Занятие 2