 |
|
Глава 10. АЛЛЕРГЕНЫ
Аллергия проявляется в нарушении обычного течения общих или местных реакций при повторном поступлении в организм веществ, называемых аллергенами. Понятие аллергена близко к понятию антигена. Аллергенами чаще всего бывают убитые микробные тела или различные продукты микробов.
Выявление состояния повышенной чувствительности организма может быть диагностическим приемом. Для этого используются аллергические пробы, воспроизводимые с помощью аллергенов.
Аллергены бактериального происхождения
Использование аллергических реакций в качестве диагностических проб основано на специфичности и высокой чувствительности их, а также на доступности и простоте их выполнения. На введение аллергена инфицированный, аллергизированный организм отвечает местной, очаговой или общей реакцией. Интенсивность и характер ответной реакции определяется состоянием организма, свойствами аллергена и методами его введения.
Практическое значение для диагностики заболеваний у человека получили кожные аллергические пробы, которые широко применяются пока лишь при ограниченном числе инфекций, а именно: при туберкулезе (реакции Пиркета и Манту), при бруцеллезе (реакция Бюрне), при туляремии, сапе, токсоплазмозе, орнитозе и других заболеваниях.
Между активным инфекционным процессом и аллергическим состоянием организма нет строгого параллелизма. Например, при туберкулезе положительная аллергическая реакция имеет место при отсутствии клинически выраженного заболевания. В других случаях (туляремия, клещевой энцефалит) она начинает появляться вскоре же (3-4 день) после начала болезни. Иногда аллергическое состояние организма выявляется не сразу, а спустя некоторое время после начала болезни (при бруцеллезе в среднем 8 дней, при скарлатине в период выздоровления и т.д.). Более резко это несоответствие проявляется в сохранении аллергического состояния и положительной аллергической реакции на протяжении ряда лет после перенесенного заболевания (бруцеллез, туляремия, клещевой энцефалит и др.). Поэтому, оценивая аллергические пробы, надо учитывать, что положительные результаты при диагностике некоторых инфекций могут быть обусловлены не только наличием заболевания, но и бывшим ранее взаимодействием организма с возбудителем.
В качестве аллергенов используются специфические препараты, получаемые из соответствующих возбудителей. Аллергены при одних заболеваниях (туберкулез, бруцеллез, caп) представляют собой фильтраты бульонных культур, при других (туляремия, гонорея) - взвесь бактерий, убитых нагреванием при определенной температуре.
В настоящее время выпускаются следующие аллергены: бруцеллин, тулярин для накожного и внутрикожного применения, альттуберкулин, сухой очищенный туберкулин, токсоплазменный и сибиреязвенный аллергены.
Разработаны также методы получения аллергенов из стафилококков, стрептококков, дизентерийных бактерий, препарат для аллергической, диагностики проказы (лепрамин) и др. Срок годности аллергенов - 1 год.
Аллергены из паразитических грибов
Каждый из аллергенов этой группы представляет собой полученную из соответствующих грибов полисахаридно-белковую фракцию. Выпускают их в ампулах в объеме 1 мл. Они имеют вид прозрачной или слегка опалесцирующей жидкости, бесцветны (возможен желтоватый оттенок). Основной метод введения аллергенов из грибов внутрикожный (0,1 мл). Результат реакции учитывают через 24 ч. Аллергены из грибов не содержат консерванта, поэтому содержимое вскрытых ампул можно использовать в течение 4 ч с момента вскрытия.
Аллерген из дрожжеподобных грибов рода Candida albicans используется для диагностики кандидоза, оценки специфической сенсибилизации организма к дрожжеподобным грибам рода Candida albicans, а также для наблюдения за изменением реактивности больного в процессе гипосенсибилизирующей терапии.
Аллергены из плесневых грибов (Aspergillus flavus и Penicillium chrisogenium) используют для диагностики плесневого микоза и определения степени сенсибилизации к плесневым грибам рода Penicillium и Aspergillus.
Аллерген из грибов Trichophyton interdigitale предназначен для выявления специфической сенсибилизации организма к грибам вида Trichophyton interdigitale, а также для наблюдения за динамикой аллергии у больных в процессе лечения.
Неинфекционные аллергены
Все аллергены неинфекционной природы используют как для определения аллергизирующего агента, так и с целью последующей десенсибилизирующей терапии. Аллергены дозированы в единицах белкового азота.
Пыльцовые аллергены. Препараты представляют собой водно-солевые экстракты пыльцы различных видов растений с содержанием пыльцового масла или без него. Основным действующим началом в таких препаратах служит белковый комплекс. Пыльцовые аллергены имеют окраску, зависящую от вида растительной пыльцы: от бесцветного и желтоватого до темно-коричневого. Препараты выпускают в ампулах по 0,5 мл или флаконах по 4,5 мл, закрытых резиновой пробкой и металлическим колпачком.
По виду растительного сырья выпускаемые пыльцовые аллергены могут быть разделены на следующие основные группы:
1) аллергены из пыльцы деревьев: березы, ольхи, орешника, клена, ясеня, тополя, осины, дуба, бузины, ивы, сосны, ели, вяза, каштана;
2) аллергены из пыльцы луговых злаков: тимофеевки, райграса, овсяницы, лисохвоста;
3) аллергены из пыльцы культурных злаков - ржи;
4) аллергены из пыльцы сорняков: амброзии, крестовника, одуванчика, лебеды, полыни, пырея.
Пыльцовые аллергены могут выпускаться и в сухом виде. Сухой аллерген представляет собой лиофилизированный водно-солевой экстракт пыльцы без пыльцового масла. Препарат выпускается комплектами: 1 флакон сухого аллергена, 1 флакон растворителя, 1 флакон тест-контрольной жидкости, 7 флаконов разводящей жидкости. Срок годности сухого аллергена - 4 года с момента высушивания.
Бытовые аллергены. К бытовым аллергенам относятся препараты следующих наименований: аллерген из домашней пыли, аллерген из гостиничной пыли, аллерген из библиотечной пыли, аллерген из пера подушек. Аллергены представляют собой водно-солевые экстракты указанных видов пыли, действующим началом которых является белковый комплекс.
Сенсибилизирующая активность бытовых аллергенов определяется двумя основными компонентами:
1) структурой и органическим составом пыли;
2) находящимися в пыли микроклещами.
Аллергены имеют вид прозрачной жидкости с желтоватым оттенком. Препараты разливают в стеклянные флаконы и выпускают в коробках в комплекте с тест-контрольной и разводящей жидкостями.
Эпидермальные аллергены. Данная группа включает препараты, изготовляемые из следующих продуктов: перхоти и волос человека, перхоти лошади, шерсти собаки, кошки, овцы, козы, кролика, морской свинки, пера курицы, утки, гуся и др. Основным действующим началом данного вида аллергенов является белковый компонент, извлекаемый из сырья методом водно-солевой экстракции. Препараты выпускают в объеме 0,5 мл в ампулах или в объеме 4,5 мл во флаконах, закрытых резиновой пробкой и металлическим колпачком. Они стерильны и прозрачны. Большинство аллергенов бесцветно, некоторые имеют желтоватый оттенок.
Пищевые аллергены. Эти препараты предназначены для выявления сенсибилизации больных к пищевым продуктам. В настоящее время выпускаются аллергены, изготовленные из рыбы, коровьего молока, целого куриного яйца и его компонентов (желтка и белка).
Препараты представляют собой водно-солевые экстракты пищевых продуктов.
Глава 11. АГГЛЮТИНИРУЮЩИЕ, ПРЕЦИПИТИРУЮЩИЕ, ГЕМОЛИТИЧЕСКИЕ И ЛЮМИНИСЦИРУЮЩИЕ СЫВОРОТКИ. КОМПЛЕМЕНТ
Диагностические иммунные сыворотки широко применяются для определения вида или типа микроба, выделенного от больного или носителя и для определения природы неизвестного белка при условии, если его можно получить в коллоидном состоянии. Приготовление диагностических сывороток в принципе не отличается от приготовления лечебно-профилактических сывороток. В зависимости от характера антигена, послужившего для иммунизации животного, сыворотка последнего приобретает различные свойства.
Специфические свойства иммунных сывороток могут быть обнаружены путем изучения действия их на соответствующие антигены. В зависимости от условий опыта у таких сывороток можно наблюдать агглютинирующее (склеивающее), преципитирующее (осаждающее) и литическое (растворяющее) действие. Применительно к наблюдаемым феноменам принято говорить о соответствующих иммунных телах, содержащихся в сыворотках: агглютининах, преципитинах, лизинах и пр.
Агглютинирующие сыворотки
При идентификации микробов, наряду с определением морфологических, культуральных и биохимических свойств их, широко используются диагностические агглютинирующие сыворотки. Агглютинацией называется склеивание микробов, скучивание их под влиянием специфических антител - агглютининов, содержащихся в иммунной сыворотке.
Реакция агглютинации в настоящее время является наиболее часто применяемой, нередко единственной в смысле определения и выделения различных видов из группы морфологически неотличимых бактерий. Микробная клетка является сложным комплексом антигенов, что является причиной так называемой групповой агглютинации, выражающейся в том, что иммунная сыворотка агглютинирует не только гомологичный микроб, но и другие бактерии из той же группы. Групповая агглютинация затрудняет определение вида выделенного микроба и серологическую диагностику заболевания.
Устранить групповую агглютинацию можно, удалив из сыворотки антитела в отношении антигенов, являющихся общими для гомологичного микроба и для родственных с ним. Это достигается путем смешения небольшого количества сыворотки с густой взвесью микробов, дающих групповую агглютинацию, что ведет к адсорбции на их поверхности соответствующих антител. В жидкости, полученной после центрифугирования, остаются антитела лишь в отношении гомологичного микроба.
Иммунные сыворотки, лишенные антител к групповым антигенам и сохранившие лишь антитела к тому специфическому антигену, которым характеризуется гомологичная культура, получили название монорецепторных.
Антитела, обусловливающие агглютинацию бактерий и иных клеток, получили название агглютининов, а сыворотки, содержащие эти антитела, агглютинирующих. Сыворотки получаются путем иммунизации животных соответствующими микробами. В качестве продуцентов агглютинирующих сывороток могут быть использованы кролики, бараны, козы, ослы и лошади. Наиболее свободными от неспецифических антител являются сыворотки кроликов.
Для иммунизации животных можно применять живые и убитые культуры, являющиеся типичными по своим морфологическим, культуральным, биохимическим, серологическим и антигенным свойствам. Лучшие результаты получаются при применении формалинизированных и обработанных парами формалина микробных взвесей. Иммунизацию проводят путем введения антигена в краевую ушную вену, начиная с 500 млн. микробных тел в 1 мл и увеличивая дозу вдвое при последующих введениях. Для получения полноценных сывороток обычно бывает достаточно 3-4 инъекций с интервалами в 5 дней. На 5-7 день после третьей иммунизации берется проба крови и проверяется титр сыворотки. Титром сыворотки считается то наибольшее ее разведение, с которым получается реакция агглютинации соответствующей культуры, оцениваемая тремя крестами при помощи агглютиноскопа. При получении недостаточного титра, кролик подвергается 4-й иммунизации в той же дозе или в удвоенной, в зависимости от веса и состояния животного.
Если титр сыворотки оказывается достаточным, то в тот же день у кролика производится кровопускание. Кровь можно получить тремя способами:
1) из ушной вены;
2) из сердца;
3) из сонной артерии (тотальное кровопускание).
На наружной поверхности уха в месте сплетения кровеносных сосудов делается надрез бритвенным ножичком и кровь по каплям собирается в большую стерильную пробирку. После взятия крови кролику подкожно вводится стерильный физиологический раствор (не менее половины объема взятой крови). Взятие крови из уха кролика следует производить 2 раза с интервалом в 2 дня. За два кровопускания от одного кролика получается 80-120 мл крови.
Взятие крови из сердца производится однократно, в количестве 40-60 мл. Козам, ослам и баранам антиген первый раз вводится подкожно, а в дальнейшем внутривенно, с интервалами в 5 дней. У крупных животных (бараны, козы, ослы, лошади) кровопускание производится через яремную вену.
Полученная кровь ставится на 10-15 минут в термостат, образовавшийся сгусток отделяется от стенок пробирки, после чего кровь выдерживается в течение 24-48 часов в рефрижераторе при температуре 4-8 °С. В настоящее время от крупных животных (лошади, ослы и др.) кровь берут в бутыли с цитратным раствором. Плазму дефибринируют раствором хлористого кальция.
К полученной сыворотке добавляется консервант. Сыворотка (в нативном виде) выдерживается не менее 1 месяца при температуре 4-8 °С для стабилизации титра, после чего определяется окончательный титр ее к гомологичным штаммам и. наличие групповой реакции путем постановки реакции агглютинации с набором соответствующих живых культур в количестве 3-5 штаммов каждого вида. Титр групповых агглютининов не должен превышать 1/8 титра к гомологичным культурам.
Институтами вакцин и сывороток выпускаются неадсорбированные и адсорбированные агглютинирующие сыворотки. Специфические адсорбированные агглютинирующие сыворотки получают путем удаления методом адсорбции неспецифических и групповых антител из нативных сывороток. Использование адсорбированных сывороток дает возможность определения выделенного микроба в пределах вида или типа при помощи реакции агглютинации на стекле без дополнительной постановки развернутой агглютинации.
Для адсорбции агглютинирующих сывороток в качестве адсорбента могут применяться живые и убитые бактерии. Наилучшей адсорбционной способностью обладает живая культура, содержащая все антигенные компоненты в неизмененном виде. Полученные микробные взвеси перед употреблением центрифугируются в необходимом количестве и добавляются к адсорбируемой сыворотке. Адсорбцию сывороток следует начинать адсорбентами, имеющими близкое родство с культурой, примененной для получения данной сыворотки. Количество добавленного антигена зависит от вида или типа истощаемой сыворотки и от ее количества.
Сыворотка с адсорбентом помещается в термостат при 37 °С на срок от 2 до 18 часов и затем в рефрижератор до следующего дня. Истощаемая сыворотка после каждой адсорбции проверяется в реакции агглютинации на стекле как с культурами того вида, которыми ведется истощение, так и с культурами, реагировавшими с ней при первоначальном контроле, а также с гомологичными, культурами.
Полностью адсорбированные сыворотки освобождаются от микробных тел путем центрифугирования или сепарирования. Если к нативной сыворотке не добавлялся консервант, то к полученной серии сыворотки следует добавить 1-2 % перекристаллизованной борной кислоты. Затем сыворотка фильтруется через стерилизующий бактериальный фильтр и после выдерживания в течение 2-х суток при комнатной температуре испытывается на стерильность, специфичность и высоту титра.
Контроль на специфичность адсорбированных агглютинирующих сывороток проводится до и после фильтрования - реакцией агглютинации на стекле и развернутой реакцией агглютинации с гомологичными и гетерологичными культурами. Ясно выраженная положительная реакция агглютинации, получаемая с 3-5 гомологичными культурами в течение 1 минуты при комнатной температуре, при отсутствии реакции агглютинации с культурами других серологических типов в течение 20 минут служит критерием для выпуска адсорбированных сывороток. Диагностические агглютинирующие сыворотки разливаются по 1 мл в соответствующие ампулы, которые упаковываются по нескольку штук (не более 10) в коробку.
Агглютинирующие сыворотки необходимо хранить в темном сухом месте при 4-10 °С. При правильном содержании сыворотка сохраняет свою активность в течение одного года со дня изготовления.
Агглютинирующие адсорбированные сыворотки выпускаются и в сухом виде. Сыворотки перед высушиванием в стерильных условиях разводят сахарозо-желатиновой средой, разливают по 1 мл в стерильные ампулы и высушивают из замороженного состояния в условиях глубокого вакуума.
Преципитирующие сыворотки
Преципитирующие сыворотки применяются для постановки реакций преципитации с целями диагностики некоторых инфекционных заболеваний, для определения природы неизвестного белка при условии, если его можно получить в коллоидном состоянии, в судебно-медицинской практике для распознавания видовой принадлежности крови, в санитарии, химии и т.д.
Реакция преципитации характеризуется чрезвычайно высокой чувствительностью и специфичностью. Она позволяет обнаружить ничтожные следы антигена (до разведения 1:100000 и выше). Действие преципитирующих сывороток на антиген сходно с действием агглютинирующих.
Преципитирующие сыворотки получаются путем искусственной иммунизации животного живыми или убитыми микробами, а также разнообразными лизатами и экстрактами микробных клеток. Путем искусственной иммунизации можно получить преципитирующие сыворотки к любому чужеродному белку растительного и животного происхождения, а также к гаптенам при иммунизации животного полноценным антигеном, содержащим данный гаптен.
Наилучшие преципитирующие сыворотки получаются при иммунизации полным антигеном или соляно-кислой вакциной. Применяемую для иммунизации животных экстрагированную соляно-кислую вакцину готовят следующим образом: густой смыв суточной культуры дважды промывают (при центрифугировании) физиологическим раствором и обрабатывают десятикратным количеством 0,2 N соляной кислоты в течение 18-24 часов при температуре 37 °С. Затем центрифугируют, полученный осадок микробных тел дважды промывают физиологическим раствором и нейтрализуют 25 % раствором углекислой соды. Полученную вакцину оставляют в виде осадка.
По мере надобности из этого осадка готовят взвесь в физиологическом растворе, содержащую необходимое для иммунизации количество микробных тел, определяемое по оптическому стандарту. При такой обработке в вакцине остается часть полного антигена и происходит разрушение лабильных токсических белков, в результате чего сохраняется антигенность и достигается относительная атоксичность препарата.
Преципитирующие сыворотки готовятся подобно агглютинирующим, только выпускаются они с высокими титрами, не ниже 1:100000, что достигается более длительной иммунизацией животных. Небольшие дозы (0,5 мл) антигена вводятся в течение 2-3 недель по 3 дня подряд с перерывом в 4 дня. Более массивные дозы (1-2-3 мл) вводятся с интервалами в 4-6 дней по 8-12-16 раз. Значительной эффективностью обладает разделение иммунизации на несколько циклов, из которых один производится внутривенно (6-8 инъекций по 1-2 мл), а другой - крупными дозами внутрибрюшинно (6-8 инъекций по 3-5 мл). Кровопускание производится на 8-12-й день после последнего введения антигена. Полученная сыворотка консервируется добавлением 1-2 % сухой борной кислоты или 0,5 % хлороформа. Готовый препарат контролируют на специфичность, стерильность и высоту титра. При титровании преципитирующей сыворотки определяется то предельное разведение антигена, которое может быть обнаружено при помощи цельной или разведенной иммунной сыворотки.
Гемолитическая сыворотка
Гемолитическая сыворотка представляет собой сыворотку кролика, иммунизированного отмытыми эритроцитами барана. Гемолитическая сыворотка самостоятельно для серологического диагноза инфекционных болезней не применяется, а используется как составная часть гемолитической системы при постановке реакции связывания комплемента.
Иммунизация кроликов проводится отмытыми эритроцитами барана с интервалами в 48 часов. Каждый кролик получает в ушную вену 4 инъекции бараньих эритроцитов в повышающейся концентрации:
1 инъекция-3 мл 25 % взвеси бараньих эритроцитов,
2 инъекция-3 мл 50 % взвеси бараньих эритроцитов,
3 инъекция-3 мл 75 % взвеси бараньих эритроцитов,
4 инъекция-3 мл 75 % взвеси бараньих эритроцитов.
Через 6 дней после последней инъекции у кроликов берется кровь из ушной вены в два приема с интервалом в один день в количестве 60-80 мл. Кровь оставляется при комнатной температуре на 1-2 часа, затем при температуре 3-6 °С на 20-24 часа. На следующий день сыворотку отсасывают после центрифугирования в стерильную колбу.
Полученная гемолитическая сыворотка инактивируется 30 минут при 55-56 °С и консервируется добавлением сухой борной кислоты из расчета 3 % или карбол-глицерина из расчета 100 мл консерванта на 1 литр сыворотки.
Консервированная сыворотка выдерживается в леднике в течение 5 дней, после чего титруется.
Титром гемолитической сыворотки называется се максимальное разведение, способное в объеме 0,5 мл растворить 0,5 мл 3 % взвеси бараньих эритроцитов в присутствии 0,5 мл разведенного комплемента в течение 1 часа при температуре 37 °С.
Гемолитическая сыворотка должна быть прозрачной с титром не ниже 1:1200, способной лизировать бараньи эритроциты только в присутствии комплемента. Гемолитическая сыворотка разливается в ампулы емкостью 1-2 мл и хранится при температуре 3-5 °С. Срок годности 6 месяцев.
Антивирусные сыворотки
Диагностические антивирусные сыворотки получили широкое распространение для определения вида и типа выделенного вируса. Изготовление антивирусных диагностических сывороток не отличается от изготовления антибактериальных.
Получение антивирусных сывороток проводят на определенном виде животных (кролики, морские свинки, крысы и др.), что связано с особенностями того или иного вируса. Животные, чаще кролики, иммунизируются живым или инактивированным вирусом:
После нескольких иммунизаций у животных берут кровь и определяют количество антител в сыворотке. Сила диагностической противовирусной сыворотки определяется ее титром, т.е. наибольшим разведением, дающим соответствующую реакцию иммунитета.
Диагностические антивирусные сыворотки используются в постановке реакций преципитации, связывания комплемента, нейтрализации вируса и реакции торможения гемагглютинации. Наибольшее распространение получили реакции нейтрализации, связывания комплемента и торможения гемагглютинации.
Люминесцирующие сыворотки
Люминесцирующие сыворотки применяются для микробиологической диагностики ряда инфекционных заболеваний, а именно для обнаружения бактерии, вирусов, риккетсий и простейших, для определения локализации антигенов в организме, тканевых срезах и пр. Во многих микробиологических исследованиях широко используется метод люминесцирующих антител. Этот метод, основанный на сочетании иммунологической специфичности реакции между антигеном и антителом и люминесцентной микроскопии, позволяет обнаруживать и идентифицировать бактерии, вирусы, риккетсии, грибки, простейшие и растворенные антигены в микроскопическом препарате.
Люминесцентно-серологический метод обладает высокой чувствительностью, достаточно специфичен, отличается простотой проведения и позволяет быстро получить ответ.
Люминесцирующие сыворотки готовят из специфических иммунных сывороток, которые в свою очередь получают подобно агглютинирующим и преципитирующим сывороткам. Из них извлекают глобулиновую фракцию методом высаливания сернокислым аммонием. Полученные глобулины обрабатывают флюорохромами, изоцианатом флюоресцеина или изотиоцианатом флюоресцеина в соотношении 3 мг красителя на 100 мг белка. Обработанные таким образом белки-антитела обладают способностью люминесцировать (светиться) в ультрафиолетовых или фиолетово-синих лучах. Такие люминесцирующие антитела используются для обнаружения соответствующего микроба (антигена). Наличие и локализация микробов (антигена) в микроскопическом препарате выявляются в результате реакции антиген - антитело. Продукт этой реакции ярко люминесцирует и может быть открыт даже в отдельных участках клеток и в единичных бактериях. Единичные клетки возбудителей могут быть идентифицированы в мазках па фоне обильной посторонней микрофлоры.
Помимо описанных люминесцирующих сывороток в микробиологической практике широко применяются люминесцирующие нормальные сыворотки разных видов животных и человека. Эти сыворотки используются при непрямом методе определения антигенов и антител. Они служат для обнаружения комплексов антиген 4-антитело и являются антисыворотками против глобулинов сыворотки того вида животного, которое иммунизировалось для получения специфической сыворотки. В основном применяется люминесцирующая противокроличья сыворотка, иногда люминесцирующие противолошадиная и противочеловеческая сыворотки.
Непрямой метод использования люминесцирующих антител заключается в том, что на препарат, содержащий микроба (антиген), наносят специфическую иммунную сыворотку. Молекулы гамма-глобулинов из примененной сыворотки, взаимодействуя с гомологичным антигеном, специфически адсорбируются в местах локализации его и обнаруживаются с помощью люминесцирующей антигамма-глобулиновой сыворотки.
Получение люминесцирующей противокроличьей или противолошадиной сывороток осуществляется путем иммунизации петухов (в первом случае) или кроликов, ослов гамма-глобулиновой фракцией нормальной сыворотки. Полученная видовая иммунная сыворотка обрабатывается флуорохромами.
Люминесцирующие диагностические сыворотки, высушенные методом лиофильной сушки, сохраняют свою активность при комнатной температуре более года.
В настоящее время разработаны методы производства люминесцирующих глобулинов: антирабического, сыпно-тифозного, Ку-риккетсиозного, бруцеллезного, туляремийного, сибиреязвенного, противочумного, дизентерийного (Зонне и Флекснера), холерного и др., а также люминесцирующих антисывороток, против глобулинов кролика, морской свинки, лошади, барана и человека - для непрямого иммунолюминесцентного метода.
Комплемент
Комплемент - это совокупность нескольких нормальных компонентов свежей сыворотки с различными физико-химическими свойствами. Природа комплемента не вполне ясна.
Он содержится в большинстве сывороток теплокровных и холоднокровных животных. Комплементарная функция выражена наиболее интенсивно в сыворотке морских свинок, поэтому последние и служат в лабораториях донорами комплемента.
Основным свойством комплемента является его способность вызывать лизис клеток, сенсибилизированных соответственными иммунными сыворотками, а также адсорбироваться системами антиген + антитело.
Комплемент широко применяется в медицинской и ветеринарной практике для серологической диагностики ряда инфекционных заболеваний в постановке реакции связывания комплемента (сифилис, гонорея, бруцеллез, сап, туляремия, проказа, актиномикоз, риккетсиозы, грипп, клещевой энцефалит и др.).
Для получения комплемента используются морские свинки весом 400-600. Кровь у них берут из сердца в количестве 6-8 мл, после чего подкожно вводят физиологический раствор. Взятие крови у одной и той же морской свинки производится не чаще 1 раза
в 15-20 дней. Для получения одной серии комплемента делается смесь сыворотки от 30-50 свинок. Обработка крови для получения сыворотки производится обычным, описанным выше способом.
Консервантом в жидком комплементе является смесь из 4,5 % раствора борной кислоты и сернокислого натрия. Сила комплемента определяется его титром, т.е. наименьшей дозой, способствующей полному гемолизу 1 мл сенсибилизированных бараньих эритроцитов. Для постановки реакций иммунитета (гемолиз, бактериолиз, РСК) берут рабочую дозу комплемента, которая на 20-30 % превышает вытитрованную минимальную дозу, так как в реакциях активность комплемента может оказаться несколько подавленной другими ингредиентами (антигеном, сывороткой).
Комплемент пригоден к отпуску при титре от ОД до 0,25 в разведении 1:10. Он должен быть прозрачным, негемолизированным, обладать способностью адсорбироваться комплексом антиген + антитело и не быть гемотоксичным.
Комплемент выпускается в жидком виде со сроком годности в 2 месяца при условии хранения при температуре 3-6 °С и в высушенном состоянии со сроком годности в 3-4 года.
Препарат сухого комплемента сохраняется при обычной комнатной температуре.