 |
|
Лабораторная работа
1. Определение активности a-амилазы в крови
| Оборудование: | 1. | Штатив с пробирками. |
| 2. | Мерная коническая пробирка. | |
| 3. | Пипетки на 1 мл и 0,1 мл. | |
| 4. | Термостат. | |
| 5. | КФК. | |
| Реактивы: | 1. | Крахмальный субстрат. |
| 2. | Раствор йода. | |
| 3. | Дистиллированная вода | |
| 4. | Сыворотка крови, моча, слюна. |
Принцип метода. Метод основан на колориметрическом определении уменьшения концентрации крахмала в пробах после ферментативного гидролиза по сравнению с исходным уровнем, что служит мерой активности амилазы.
Ход работы. В 2 пробирки (опытная и контрольная пробы) наливают по 0,5 мл крахмального субстрата. Опытную пробу прогревают при 37ОС 5 мин, после чего добавляют в нее 0,01мл сыворотки и инкубируют 8 мин при 37ОС в термостате. Сразу же после инкубации опытной пробы в обе пробирки добавляют по 0,5 мл раствора йода и доводят объем проб до 5 мл дистиллированной водой. Сразу же колориметрируют их при красном светофильтре в кюветах толщиной 1 см против воды.
Активность a-амилазы рассчитывают по формуле:
(ЕК – ЕОП)/ЕК х 150 = г крахмала, гидролизованного 1л сыворотки за 1 час инкубации (г/л), где
ЕК – оптическая плотность контрольной пробы,
ЕОП – оптическая плотность опытной пробы,
150 – коэффициент пересчета на количество крахмала в г, гидролизованного 1 л сыворотки за 1 час инкубации.
Норма активности амилазы в сыворотке – 16-30 г/л в час
2.Определение активности a- амилазы в моче
Работу проводят так же, как с сывороткой крови, только в опытную пробу вместо сыворотки добавляют 0,01 мл мочи, разведенной в 100 раз. При расчете активности фермента в формулу добавляют коэффициент, учитывающий разведение мочи.
Норма активности амилазы в моче – 28-160 г/л в час
3. Определение активности a-амилазы в слюне
Работа проводится так же, как с сывороткой и мочой. В опытную пробу добавляют 0,01 мл разведенной в 10 раз слюны. При расчете учитывают коэффициент разведения.
Норма активности амилазы в слюне – 320-640 г/л в час.
Диагностическое значение определения амилазы
Гиперамилаземия. При остром панкреатите активность амилазы крови возрастает в первые 12 – 24 часа в 10-40 раз, затем быстро снижается и приходит к норме на 2-6 сутки.
При остром аппендиците, перитоните, перфоративной язве желудка и двенадцатиперстной кишки активность амилазы повышается в 3-5 раз.
Гиперамилаземия наблюдается также при паротите.
Гиперамилаземию вызывают: адреналин, гистамин, секретин, фуросемид, салицилаты, антикоагулянты, морфин, пантопон, опий, кодеин, тетрациклин, алкоголь.
Гипоамилаземия. Чаще всего снижение активности амилазы свидетельствует о недостаточности экзокринной функции поджелудочной железы. Также встречается у больных гепатитами, циррозами, злокачественными опухолями с метастазами в печень, обширными ожогами кожи, сахарным диабетом, гипотиреозом, при интоксикациях.
Гиперамилазурия. При остром панкреатите в суточной моче активность амилазы возрастает в 10-40 раз. При этом активность амилазы остается высокой до 7 суток.
Отношение активности амилазы в крови к активности амилазы в моче служит показателем функциональной полноценности почечного фильтра.