 |
|
Проводят по методике, описанной в разделе 2.2.2.1.
Для посева отбирают по 1 см3 воды и переносят в 2 чашки Петри и заливают расплавленной и охлажденной до 45…50 0С плотной питательной средой (МПА). После инкубации посевов подсчитывают количество колоний в каждой чашке, а затем результаты суммируют и делят на два.
Метод о9.2.2.2 Определенияе общих и термотолерантных колиформных бактерий в воде методом мембранных фильтров.
Метод основан на фильтрации установленного объема воды через мембранные фильтры, выращивании посевов на дифференциально-диагностической среде и последующей идентификации выросших колоний.
Для анализа точно отмеряют 100 см3 воды и фильтруют этот объем через стерильный мембранный фильтр. После окончания фильтрования фильтр осторожно приподнимают фламбированным пинцетом и переносят в чашку Петри со средой Эндо. Поверхность фильтра с осевшими на ней микроорганизмами должна быть обращена вверх. Чашки с фильтрами ставят в термостат дном вверх и инкубируют посевы при температуре 37 0С в течение 24 часов.
Результат считается отрицательным, если на фильтрах вообще не выросли колонии, или выросли колонии с неровными краями и поверхностью.
При наличии типичных лактозоположительных колоний, дающих отпечаток на обратной стороне мембранного фильтра и среде – темно красных, красных с металлическим блеском, а также лактозоотрицательных – розовых без отпечатков, подсчитывают число колоний каждого типа.
Для идентификации отбирают не менее 5 колоний каждого вида и делают посев на скошенный питательный агар. Посевы инкубируют при 370С в течение 16-18 часов. Далее проводят биохимические тесты с чистыми культурами: оксидазный тест и тест образования кислоты и газа при ферментации лактозы при температуре 37 0С для определения общих колиформных бактерий и при 44 0С при определении термотолерантных колиформных бактерий.
9.2.2.3 Определение содержания общих и термотолерантных колиформных бактерий титрационным методом
Метод бродильных проб (или титрационный метод) основан на накоплении бактерий после посева установленного объема воды в жидкую накопительную среду, с последующим пересевом на дифференциально-диагностическую среду для идентификации выросших колоний.
Титрационный метод определения содержания общих и термотолерантных колиформных бактерий в воде может быть использован:
при отсутствии материалов и оборудования, необходимых для выполнения анализа методом бродильных проб;
при анализе воды с большим содержанием взвешенных частиц;
в случае преобладания в воде посторонней микрофлоры, препятствующей получению на фильтрах изолированных колоний общих колиформных бактерий.
Первый этап исследованиязаключается в посеве 3-х объемов воды по 100 см3 в концентрированную лактозопептонную среду. Посевы инкубируют при температуре 37 0С в течение 24-48 часов для определения общих колиформных бактерий и при 44 0С – при определении термотолерантных колиформных бактерий в течение 24±2 часов. Если в колбах не обнаружены признаки роста (об этом судят по отсутствию газа в поплавках) то колиформные бактерии отсутствуют в 100 см3.
На втором этапе исследованийиз пробирок и колб, где отмечено наличие роста и образование газа, производят высев петлей в сектора среды Эндо. Посевы на среде Эндо выдерживают в термостате при 37 0С в течение 18-20 часов. Отсутствие колоний, типичных для бактерий группы кишечных палочек, дает отрицательный ответ о содержании этих микроорганизмов в исследуемом объеме воды.
9.2.2.4 Определение споровых сульфитредуцирующих клостридий в воде
прямым посевом.
Из каждой пробы воды делают посев 20 см3 в железосульфитный агар. Для этого в стерильные пробирки вносят по 10 см3 в 2 пробирки объемом 30 см3 или по 5 см3 в 4 пробирки вместимостью 15 см3. Посевы заливают горячим (75…80 0С) железосульфитным агаром в количестве, превышающем объем воды в 2 раза. Среду заливают по стенке пробирки, избегая образования пузырьков воздуха. После этого пробирки быстро охлаждают, помещая их в емкость с холодной водой для создания анаэробных условий. Посевы инкубируют при 44 0С в течение 24±2 часов. Если после культивирования не наблюдается почернения среды в пробирках, то считают, что сульфитредуцирующие клостридии отсутствуют в 20 см3.
Исследование чистоты рук
Закрепленный на деревянном или металлическом стержне стерильный тампон смачивают стерильной водой (или физиологическим раствором) и протирают ими ладони, тыльную поверхность рук, под ногтями и между пальцами обеих рук. Тампон погружают в пробирку с водой, в которой проводилось смачивание, содержимое пробирки хорошо взбалтывают, отбирают 1 см3 и готовят разведения (1:10 и 1:100).
Для определения КМАФАнМ проводят посев разведений в чашки Петри на мясопептонный агар с последующим термостатированием при 370С в течение 48 часов. Остаток смыва вместе с тампоном высевают в пробирки с 5 см3 среды Кесслера и проводят культивирование при 43 0С в течение 24 часов.
Учет результатов исследований. Чистоту рук оценивают по количеству микроорганизмов в 1 см3 смыва при отсутствии газообразования в пробирке со средой Кесслера с поплавком (при отсутствии кишечной палочки). При оценке состояния рук по содержанию в смывной воде мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) руководствуются описанием, изложенным в разделе 4.1.4 данной лабораторной работы.
2-е занятие
На втором занятии студенты исследуют:
посевы воздуха на мясопептонном агаре и на среде Сабуро. Подсчитывают количество выросших колоний и по формуле Омелянского (раздел 4.2.1.) определяют количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, содержание грибов и дрожжей в 1 м3 воздуха. Определение качественного состава микрофлоры воздуха проводят по методикам, описанным в разделах 2.2.4 и 2.2.5. На основании результатов исследований делаются выводы о санитарном состоянии и качественном составе микрофлоры воздуха.
посевы водопроводной воды на мясопептонном агаре и среде Кесслера. Подсчитывают количество выросших колоний на мясопептонном агаре. Если в чашках выросло более 50 колоний, то санитарное состояние воды неудовлетворительное. Внимательно рассматривают посевы воды на жидкой накопительной среде (лактозо-пептонной среде или среде Кесслера). Если на среде есть рост, то лаборанты к занятию делают пересев на среду Эндо. Студенты рассматривают посевы в чашках Петри на среде Эндо и при наличии типичных колоний готовят фиксированные мазки, окрашивают их по Граму. Если в мазках при микроскопии с объективом на х90 обнаруживаются грамотрицательные мелкие палочки, располагающиеся по одиночке, без спор, то считают, что в исследуемой пробе воды присутствуют кишечные палочки и делают вывод о том, что исследованная вода не соответствует требованиям СанПиНа и в 100 см3 воды обнаружены общие колиформные бактерии.
посевы с рук на мясопептонном агаре и среде Кесслера. Делают вывод о чистоте рук согласно описанию, изложенному в разделе 4.2.3.
Контрольные вопросы
1.Какая служба осуществляет государственный санитарный надзор на предприятиях молочной промышленности?
Какие формы государственного санитарного надзора Вы знаете?
какими полномочиями наделены органы и учреждения государственного санитарного надзора?
Кто осуществляет внутриведомственный санитарный надзор на предприятиях молочной промышленности?
По каким микробиологическим показателям проводят оценку санитарно-гигиенического состояния воздуха?
2.В чем сущность седиментационного метода определения микроорганизмов в воздухе?
3.В чем заключается сущность аспирационного метода определения микроорганизмов в воздухе?
4.Каким образом можно снизить бактериальную обсемененность воздуха?
Какие микробиологические показатели определяются согласно ГОСТу в питьевой воде для оценки ее санитарного состояния?
Каким образом готовятся смывы с оборудования для оценки его санитарного состояния?
Как проводят контроль чистоты трубопроводов, шлангов, рукавов?
Какие микробиологические показатели определяют в смывах с оборудования, трубопроводов, посуды?
Каким образом проводят микробиологический контроль вспомогательных и упаковочных материалов?
Как определить качество мойки и дезинфекции посуды?
Как проводят микробиологический контроль чистоты рук работников?
Как проводят контроль обработки рук работников хлорной известью?
Как определить содержание микроорганизмов в 1 м3 воздуха?
Что такое коли-титр, коли-индекс воды?
Какие способы обеззараживания воды Вам известны?
Каким образом определяется коли-титр и коли-индекс в питьевой воде?
Как рассчитывается содержание микроорганизмов в 1 м3 воздуха при использовании седиментационного метода?
Какие микроорганизмы являются санитарно-показательными для воздуха и как они определяются?