Главная | Обратная связь

Приборы, вспомогательное оборудование, лабораторная посуда.

1. Хроматограф жидкостной изократический высокого давления со спектрофотометрическим проточным детектором с длиной волны 280 нм и системой подготовки элюента и хроматографической, предварительно откалиброванной по стандартным глобулярным водорастворимым белкам известной молекулярной массы.

2. Колонка TSK GEL G2000SWLX (0.8*30 см) (кат. номер 18674 по каталогу Tosohbioscience)

3. Центрифуга лабораторная (6000 об/мин)

4. Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г и погрешностью ±0,0001 г..

5. Пробирки типа «эппендорф» объемом 2,5 см³.

6. Фильтры капроновые 0,45 мкм или аналогичные.

7. Пипетки 4-1-2 или 5-1-2, 4-2-10 или 5-2-10, 4-2-25 или 5-2-25 по ГОСТ 29227.

8. Фильтрующие насадки 0,22 мкм.

Допускается использование приборов и посуды с метрологическими и техническими характеристиками и реактивов квалификацией не ниже указанных.

 

Отбор проб.

Для учета специфики отбора проб отдельных видов продуктов следует руководствоваться действующей нормативно-технической документацией на конкретную продукцию.

 

 

Подготовка к определению.

Образец молока объемом 5,0 см³ помещают в полиэтиленовую пробирку объемом 6,0 см³. Пробирку центрифугируют 60 минут при 6000 об/мин и температуре +5°С. Аликвоту прозрачной части фильтруют через фильтрующую шприцевую насадку с размером пор 0,22 мкм в стеклянный флакон. Объем фильтрата должен составлять не менее 2,0 см³.

 

Условия хроматографии и калибровка хроматографической колонки.

Хроматографическая колонка калибруется по стандартным глобулярным водорастворимым белкам известной молекулярной массы по времени удерживания (или расстоянию максимума пика на ленте самописца). Строится калибровочная кривая

зависимости десятичного логарифма молекулярной массы от времени удерживания (или расстояния на ленте самописца), как это показано на рис 1.

Условия хроматографии следующие: скорость элюирования 0,2 см³/мин, ультрофиолетовый проточный детектор 115UV(280 нм), объем образца, инжектируемого в колонку 100 мкл.

В качестве элюента используется 0,2М раствор NaCl. Элюент готовится следующим образом: в колбу емкостью 1000 см³ вносится 24,0 г натрия хлорида, добавляется 600 см³ дистиллированной воды. После полного растворения объем доводится до 1000 см³ дистиллированной водой. Полученный раствор отфильтровывается через фильтр с размером пор 0,45 мкм.

В откалиброванную колонку инжектируется 100 мкм³ раствора обезжиренного и отфильтрованного, как описано в разделе 5 сырого коровьего молока и получаемая хроматограммма (рис. 2) используется как эталонный образец сырого коровьего молока для сравнения с хроматограммами таким же образом обезжиренного и отфильтрованного коровьего молока анализируемых образцов.

 

Проведение хроматографического анализа.

Исследуемый образец обезжиренного и отфильтрованного молока хроматографируется при условиях, описанных в разделе 6.

Характерные хроматограммы сухого молока приведены на рис.3 и 4.