Главная | Обратная связь

Лабораторные работы

Лабораторная работа 1.Переваривание крахмала ферментами слюны человека.

В слюне содержатся амилолитические ферменты - амилаза и мальтаза. Оптимум действия амилазы и мальтазы находится в пределах нейтральной реакции среды при нормальной температуре тела (при 37°).

Цель работы: исследование амилолитической активности слюны.

Оборудование: термостат или водяная баня с температурой 37-38⁰ С; спиртовка; штатив с пробирками; пипетки; слюна человека; 1%-ный раствор вареного крахмала; 1%-ный раствор сырого крахмала; раствор йода или раствор Люголя; реактив Фелинга; 0,5%-ный раствор НСl; лакмусовая бумага; стеклограф; лед или холодильник.

Ход работы.

1. Заблаговременно готовят растворы и реактивы.

Для приготовления раствора Люголя необходимо 0,1 г кристаллического йода и 0,15 г KI растереть в ступке пестиком и добавить 150 мл дистиллированной воды. В качестве реактива на крахмал можно использовать 5%-ный спиртовой раствор йода: его нужно в 8 раз разбавить водой.

Реактив Фелинга состоит из двух растворов, которые готовят и сохраняют отдельно и смешивают в равных объемах только перед употреблением: 1) 5 г NaOH и 17,5 г сегнетовой соли растворяют в 50 мл воды; 2) 3,5 г CuS0₄ · 5Н₂О растворяют в 50 мл воды.

Слюну собирают при помощи капсулы или естественным путем, выпуская ее через воронку в пробирку. Для постановки опыта необходимо около 10 мл слюны.

2. Нумеруют пробирки от 1 до 5, ставят их в штатив и в каждую пробирку отмеривают по 1 мл слюны. Затем в 1-ю пробирку добавляют 3 мл 1%-ного раствора вареного крахмала. 2-ю пробирку нагревают на спиртовке до кипения, охлаждают и добавляют 3 мл 1%-ного раствора вареного крахмала. В 3-ю пробирку добавляют 0,5%-ный раствор НСl до появления стойкого окрашивания лакмусовой бумаги и 3 мл 1 %-ного раствора вареного крахмала. В 4-ю пробирку добавляют 3 мл 1%-ного раствора сырого крахмала. В 5-ю пробирку добавляют 3 мл 1%-ного раствора вареного крахмала.

3. Первые четыре пробирки помещают на 30 мин. в термостат или водяную баню при температуре 37-38⁰ С. 5-ю пробирку ставят в холодильник или в стакан со льдом.

4. Через 30 мин. содержимое всех пробирок делят на две части (для чего нумеруют еще пять пробирок) и исследуют на наличие крахмала и сахаров.

Содержимое пробирок, в которых присутствует крахмал, при добавлении 1-2 капель раствора Люголя приобретает синий цвет.

При добавлении к содержимому пробирок реактива Фелинга и нагревании их до кипения определяют наличие простых сахаров, т.е. продуктов расщепления крахмала ферментами слюны. При наличии простых сахаров содержимое пробирки окрашивается в буро-красный цвет.

 

Рекомендации по оформлению работы. Внесите результаты эксперимента в таблицу 1 и проанализируйте их.

Таблица 1

Исследование амилолитической активности слюны

 

№ про-бирки	Содержимое пробирки	Цвет содержимого пробирки после добавления	Результа-ты опытов
раствора Люголя	реактива Фелинга
	1 мл слюны + 3 мл вареного крахмала
	1 мл прокипяченной слюны + 3 мл вареного крахмала
	1 мл слюны + 0,5% р-р HCl + 3 мл вареного крахмала
	1 мл слюны + 3 мл сырого крахмала
	1 мл слюны + 3 мл вареного крахмала

Лабораторная работа 2.Исследование ферментативных свойств желудочного сока.

За сутки у человека выделяется 2-2,5 л желудочного сока. Основными компонентами желудочного сока являются: соляная кислота, необходимая для создания оптимального значения рН среды, и протеолитические ферменты (пепсин, гастриксин, ренин). Не менее 95% протеолитической активности желудочного сока обеспечивается пепсином и гастриксином. В желудочном соке содержится также липаза, расщепляющая жиры.

Цель работы: исследование ферментативных свойств желудочного сока.

Оборудование: водяная баня или термостат; спиртовка; штатив с пробирками; пинцет; натуральный желудочный сок; фибрин или мышцы лягушки (лучше вареные); 0,5%-ный раствор НСl; 0,5%-ный раствор NаНСО₃; стеклограф; лакмусовая бумага.

Ход работы.

1. Нумеруют четыре пробирки.

2. Наливают в 1-ю пробирку 2 мл желудочного сока. Во 2-ю пробирку помещают 2 мл желудочного сока и кипятят ее на спиртовке; в 3-ю - 2 мл желудочного сока и добавляют раствор соды до получения слабощелочной реакции (до синего окрашивания красной лакмусовой бумаги); в 4-ю - 2 мл 0,5%-ного раствора НСl.

3. Во все пробирки кладут одинаковое количество фибрина (0,3 г) и помещают их на 30-40 мин. на водяную баню или в термостат при температуре 38° С.

4. Через 30-40 минут инкубации пробирки извлекают и оценивают состояние кусочков фибрина.

 

Рекомендации по оформлению работы. Опишите, как изменились кусочки фибрина во всех пробирках. Результаты опыта занесите в таблицу 12.

Таблица 12

Исследование ферментативных свойств желудочногосока

№ пробир-ки	Содержимое пробирки	Состояние кусочков фибрина	Причины изменения фибрина в пробирках
	2 мл желудочного сока + фибрин
	2 мл кипяченого желудочного сока + фибрин
	2 мл желудочного сока + р-р NaHCO3 + фибрин
	2 мл 0,5%-ного р-ра HCl + фибрин