Главная | Обратная связь

Ферментативный метод определения холестерина.

Принцип метода:

Принцип основан на действии фермента холестериноксидазы, в результате чего образуется холестенол и Н₂О₂.

_ХЭ

Эфиры холестерина + Н₂О холестерин + RCOOH

_ХО

Холестерин + О₂ ∆⁴ холестенон + Н₂О₂

_ПОД

2 Н₂О₂ + 4-аминофеназон + фенол 4(п-бензохинономоноимино)- феназон + 2 Н₂О

(красная окраска)

Интенсивность окраски пропорциональна концентрации общего холестерина в сыворотке крови.

Материал для исследования:

1. Сыворотка крови;

2. Плазма (антикоагулянт – ЭДТА).

Реактивы:

1. Реагент № 1 буфер;

2. Реагент № 2 лиофилизат;

3. Реагент № 3 стандартный раствор холестерина.

Приготовление рабочего реагента:

Растворить содержимое одного флакона № 2 в 50 мл реагента № 1.

Ход определения:

Реактивы (мл)	Холостая проба	Проба	Стандартная проба
Рабочий реагент	2,00 мл	2,00 мл	2,00 мл
Бидистиллированная вода	0,02 мл	-	-
Стандарт	-	-	0,02 мл
Сыворотка крови	-	0,02 мл	-

Смешать инкубировать 10 мин. при температуре 37ºС. Считывать значение абсорбции пробы (D_о) и стандартной пробы (D_ст) против холостой пробы при длине волны 500 нм.

Расчет результатов:

	Dо
С =	--------------	* концентрацию стандарта
	Dст

 

 

Клинико-диагностическое значение:

Содержание ХС в значительной степени зависит от пола, возраста, состава пищи (меньше у вегетарианцев).

Повышение содержания ХС может быть физиологическим при эмоциональном возбуждении, беременности и патологическим:

1. первичным – семейная гиперхолестеринемия

2. вторичным при:

· атеросклерозе;

· болезнях печени: желтухи при застое желчи, гепатите, билиарном циррозе;

· болезнях почек: нефротическом синдроме, ХПН;

· болезнях поджелудочной железы: хроническом панкреатите, злокачественных опухолях;

· сахарном диабете;

· гипофункции щитовидной железы;

· ожирении и т.д.

Снижение концентрации ХС наблюдается при:

· болезнях печени: циррозе в поздней стадии заболевания, острой инфекции печени; инфекциях, связанных с повреждением печени (при синдроме печеночной недостаточности);

· гиперфункции щитовидной железы;

· голодании;

· сепсисе;

· лихорадочных состояниях;

· злоупотреблении алкоголем и т.д.

Исследование содержания ХС целесообразно у пациентов с ранними факторами риска атеросклероза, с заболеваниями сосудов и сердца, ксантомами, гипертонией, ожирением; людей, злоупотребляющих курением; а также при лечении бета-блокаторами, мочегонными и кортикостероидами.

Если в лаборатории исследуют эфирсвязанный ХС, то соотношение эХС/общий ХС = 0,6-0,7. Уменьшение количества эХС происходит параллельно степени нарушения функции печени и резкое снижение эХС является плохим прогностическим признаком, свидетельствующим о глубоком поражении печени.

ХОЛЕСТЕРИН - ЛПВП

ХС-ЛПВП – холестерин липопротеидов высокой плотности или α-холестерин. Его содержание коррелирует с уровнем неатерогенных липопротеидов крови. В организме осуществляет защитную, антиатерогенную функцию и является «тонким» критерием, отражающим состояние липидного обмена.

Особенностью функционирования ЛПВП является то, что они осуществляют транспорт ХС от клеток сосудистой стенки, периферических органов в печень, где ХС превращается в желчные кислоты и выводится из организма. Снижениеконцентрации ХС-ЛПВПниже 0,9 ммоль/л связывается с повышенным риском атеросклероза. Повышенный уровень ХС-ЛПВП рассматривается как антиатерогенный фактор.