 |
|
Оплодотворение икры
Для оплодотворения икры от нескольких предварительно отсаженных
зрелых самцов получают сперму, которая должна быть только хорошего качества: умеренной густоты и желтоватой окраски. Брюшко самца обмывают и обтирают сухой чистой тряпкой, после чего, изгибая спину и хвостовой стебель рыбы, получают сперму. Ее собирают в чистую, совершенно сухую стеклянную баночку. Так как не вся сперма созревает одновременно, каждый самец может быть использован несколько раз.
Определение качества спермы самцов производится по измерению объема эякулята (взвеси отдельных спермиев в спермиальной жидкости, содержащей очень мало органических веществ), продолжительности движения сперматозоидов, соотношению живых и мертвых спермиев, их концентрации, оплодотворяющей способности, выясняемой по проценту оплодотворения, визуальной оценке.
Объем эякулята (отдельных порций спермиев, выводимых наружу) служит одним из важных показателей оценки половой деятельности самцов. Он
очень важен при отработке дозировок гипофизарных инъекций. О3бъем эякулята
измеряют с помощью мерной посуды с точностью до 0,1 —0,2 см .
Продолжительность движения сперматозоидов устанавливают с помощью секундомера. Наблюдения проводят следующим образом. Сперму берут из пробирки препаровальной иглой и помещают на часовое стекло, на которое заранее внесена капля воды. Сперматозоиды рассматривают под микроскопом. Останавливают секундомер, когда большая часть спермиев (более 50—69 %) переходит от поступательного движения к колебательному. Соотношение в эякуляте живых и мертвых спермиев выясняют двумя методами: во-первых, глазомерной оценкой по пятибалльной шкале и, во- вторых, вычислением процента жизнестойких спермиев по их отношению к окраске.
Первый способ дает результаты более быстро, но он менее точен.
Определение подвижности сперматозоидов по пятибалльной шкале было
предложено Г. М. Персовым:
балл 5 — заметно движение всех спермиев. Движение только поступательное и подвижность спермиев настолько велика, что трудно
акцентировать внимание на каком-нибудь одном сперматозоиде;
балл 4 — хорошо выражено поступательное движение, но в поле зрения встречаются спермии с так называемыми зигзагообразными и колебательными
движениями;
балл 3 — зигзагообразное и колебательное движение преобладает над
поступательным, уже имеются неподвижные спермии;
балл 2 — поступательного движения почти нет, имеется только
колебательное и изредка зигзагообразное; очень большой процент
неподвижных спермиев (до 75 %);
балл 1 — все спермии неподвижны.
Для оплодотворения следует использовать только сперму, оцененную
4 или 5 баллами.
Для выяснения соотношения по пятибалльной шкале маленькую каплю спермы помещают на предметное стекло, для ее активации добавляют каплю воды, препарат быстро накрывают покровным стеклом и рассматривают под большим увеличением микроскопа (увеличение в 400—600 раз).
Глазомерный подсчет проводят с помощью камеры Горяева, на которую смесителем (меланжером) наносят смешанную с водой сперму. Сперматозоиды, увеличенные в 280—400 раз, подсчитывают в пяти больших квадратах счетной камеры, каждый из которых состоит из 16 квадратиков (всего 80 малых
квадратиков), и в больших квадратах, расположенных по диагонали сетки.
Концентрацию спермиев (в млн./мм3) подсчитывают по формуле:
n*D
где:
С=
С — концентрация спермиев;
N * v -1000000 ,
n — число сосчитанных малых квадратиков (80);
D — степень разбавления (равна 200); 3
v — объем малого квадратика (1/4000 мм );
N — число больших квадратов,
1000000 — множитель для получения результатов, млн./мм 3.
Глазомерный подсчет проводят также фотоэлектрокалориметрическим
методом, который основан на способности спермы ослаблять пропускаемый через нее пучок света пропорционально ее концентрации. Такой подсчет осуществляется при помощи фотоэлектрокалориметра.
По сравнению со счетной камерой Горяева применение
фотоэлектрокалориметра позволяет ускорить процесс определения
концентрации спермиев.
При визуальной оценке качества спермы используют такие показатели, как цвет и консистенцию. Сперма хорошего качества имеет консистенцию цельного молока, а плохого — обезжиренного. В первом случае она имеет белый цвет, а во втором — голубоватый.
Определение соотношения живых и мертвых спермиев путем окраски производится при помощи 5 %-го водного раствора эозина натрия. Для этого каплю спермы смешивают с более крупной каплей краски и шлифованным краем другого стекла делают тонкий мазок на предметном стекле. Затем быстро высушивают и под микроскопом (при увеличении в 300—400 раз) просматривают в пяти полях зрения подряд по 100 спермиев. Мертвые спермии окрашиваются в розовый цвет, а живые на розовом фоне головки имеют белый
цвет. Показатели, характеризующие сперму, представлены ниже (Таблица 1).
Таблица 1
Показатели, характеризующие сперму